李敏，杨素清，王伟*，李洪峰，张慧欣

    1.冀中能源峰峰集团有限公司总医院 骨科，河北 邯郸 056201

    2.邯郸市第一医院 胸外科，河北 邯郸 056000

    3.冀中能源峰峰集团有限公司总医院 消化科，河北 邯郸 056201

    食管癌是常见消化系统恶性肿瘤，其主要组织病理学以食管鳞癌为主，发病率与死亡率较高，目前食管鳞癌的治疗方式以手术联合放化疗为主，由于肿瘤耐药性，患者5 年生存率很低，寻找新的治疗药物是提高患者生存率的重要途径[1-2]。铁死亡是细胞内铁依赖的脂质过氧化损伤导致的非凋亡性死亡，研究显示，铁死亡与肿瘤的发生发展密切相关[3]。褪黑素是由松果体分泌的吲哚类物质，具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节的作用，研究显示，褪黑素可抑制胃癌[4]、卵巢癌[5]等肿瘤细胞的增殖与迁移，促进肿瘤细胞的凋亡，且在食管癌中，褪黑素可协同5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制食管癌细胞迁移与侵袭，促进细胞凋亡，提高5-FU 对食管癌细胞的敏感性[6]。溶质运载蛋白7 家族成员11(SLC7A11)是调节铁死亡的蛋白酶，在维持细胞内外的谷胱甘肽氧化还原平衡中发挥重要作用，SLC7A11 过表达可抑制铁死亡，与胃癌、乳腺癌等肿瘤的发展密切相关[7-8]。研究显示，SLC7A11 在食管鳞癌组织中表达水平升高，与食管鳞癌的临床分期、有无淋巴结转移、及分化程度、患者预后及新辅助化疗耐药有关[9]。因此，本研究通过探究褪黑素对食管鳞癌细胞铁死亡及对SLC7A11 表达的影响，旨在揭示褪黑素调控食管鳞癌细胞铁死亡的作用机制，为食管鳞癌的分子靶向治疗提供理论基础。

    1 材料

    1.1 细胞与动物

    人食管鳞癌KYSE150 细胞购自中国科学院上海细胞库。5～6 周龄SPF 级BALB/c 雄性裸鼠，体质量16～20 g，购自武汉大学动物实验中心[生产许可证号SCXK(鄂)2019-0004]。所有实验按照《实验动物护理和使用指南》执行，均经过冀中能源峰峰集团有限公司总医院批准(动物实验伦理批号2022019)。

    1.2 主要试剂与仪器

    褪黑素(质量分数≥98%，货号M5250)、碘化丙啶(PI，规格10 mg，货号P4170)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1，规格5 mg，货号SML0583)、铁含量检测试剂盒(货号MAK025)购自Sigma 公司；DMEM 培养基(货号10566016)购自美国Gibco公司；SLC7A11 过表达质粒及空载质粒(pcDNA)购自广州锐博生物科技有限公司；MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(货号E-CK-A341)、BCA 蛋白浓度测定试剂盒(货号E-BC-K318-M)购自Elabscience 公司；RIPA 裂解液(货号R0010)购自北京索莱宝生物科技有限公司；兔抗人SLC7A11(货号ab175186)、β-actin(货号ab8227)及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG 二抗(货号ab205718)购自Abcam 公司；总谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(货号S0052)、活性氧(ROS)检测试剂盒(货号S0033S)购自上海碧云天生物技术有限公司 ......