张倩，刘艳娇，贾晓龙，何龙英，史志杰，马丽，张楠楠，李晓鹏

    邯郸市第一医院，河北 邯郸 056002

    食管癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，全球每年新发病例超过60 万例，其中约53%的患者出现在我国，食管癌病理分型主要有鳞状细胞癌和腺癌两种，我国以鳞状细胞癌为主[1]。虽然近年来手术、放化疗技术以及生物免疫疗法等新兴手段不断发展，但食管癌患者5 年生存率仍不足30%[2-3]。放疗是临床治疗中晚期食管癌及术后辅助治疗的重要手段，主要作用机制为抑制肿瘤细胞增殖和促进其凋亡与自噬，放疗敏感性降低是影响食管癌放疗效果、导致复发转移的关键因素[4-6]。因此，寻找能够增强食管癌细胞放疗敏感性的新型药物，对改善食管癌患者预后具有重要意义。

    丹参酮IIA是由唇形科植物丹参的根皮部提取的一种共轭醌、酮类化合物，具有较好的抗炎抑菌、抗氧化等药理作用，目前主要用于缺血性心血管疾病的治疗。随着药理学研究的不断深入，丹参酮IIA抗肿瘤活性逐渐得到关注[7]。磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路在细胞增殖、凋亡与自噬的调控机制中发挥着重要的信号传导作用[8]。研究证实，丹参酮IIA通过下调PI3K/Akt/mTOR 信号通路可抑制胆管癌细胞、胶质瘤细胞、喉癌细胞增殖并促进其凋亡与自噬[9-11]，可明显改善喉癌细胞顺铂化疗敏感性[12]。丹参酮IIA能够通过促进口腔鳞状细胞癌自噬而增强其放疗敏感性[13]。本实验以人食管癌Eca-109 细胞作为受试细胞，研究丹参酮IIA对人食管癌细胞放疗敏感性的影响，并基于PI3K/Akt/mTOR 信号通路探讨其潜在机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞

    人食管鳞状细胞癌Eca-109 细胞系购自青旗(上海)生物技术发展有限公司(货号BFN60808845)。

    1.2 主要试剂与仪器

    丹参酮IIA(质量分数≥98%，上海源叶生物科技有限公司，货号B20257)；PI3K 抑制剂2-吗啉代-8-苯基色酮(LY294002)、RPMI-1640 培养基、RIPA 裂解液、通用RT-PCR 反转录试剂盒(北京索莱宝生物技术公司，货号IL0270、90023、R0010、RP1100)；胎牛血清、GFP-LC3 荧光质粒、细胞转染试剂盒、Trizol 总RNA 抽提试剂(上海碧云天生物科技公司，货号C0236、C3006、C0511、R0016)；胰蛋白酶、MTT 试剂盒、Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒、BCA 法蛋白定量试剂盒、结晶紫(大连美仑生物技术有限公司 ......