王子见，马芝薇，何树妮，任媛媛，王琳琳，石玉琪，刘婷，李子恒，何凤琴

    西安文理学院 西安市秦岭天然产物开发与创新药物研究重点实验室，陕西 西安 710065

    关键字：利血平；脊髓小脑共济失调3 型；ataxin-3；蛋白包涵体；核质转运；可溶性蛋白

    脊髓小脑共济失调3 型/马查多约瑟夫病(SCA3/MJD，简称SCA3)是一种常染色体显性遗传的神经退行性疾病，是仅次于亨廷顿舞蹈症的第2 大类多聚谷氨酰胺(polyQ)疾病[1-2]。该病是由ATXN3基因编码的ataxin-3 蛋白polyQ 异常扩增引起的。一般情况下，健康人群polyQ 重复序列数目12～43，SCA3 患者会增加至51～91。正常ataxin-3 蛋白是一种胞浆蛋白，含有异常扩增polyQ 的ataxin-3蛋白在各种致病因素的刺激下进入细胞核，在核内募集其他多种组分包括转录因子、泛素蛋白酶、伴侣蛋白或RNA 等形成核内包涵体(SCA3 标志性病理特征)，从而导致核内转录异常、蛋白稳态失衡、能量代谢障碍、运输障碍等，最终导致神经细胞死亡[3-4]。因此，与其他很多神经退行性疾病的致病蛋白一样，细胞核是关键的病理位点，ataxin-3 的病理入核现象和核内包涵体的形成是SCA3 早期重要的病理特征和发病机制[5]。

    利血平是从印度萝芙木属蛇根木Rauvolfia serpentina(L.) Benth.ex Kurz 中提取的一种生物碱，是具有温和持久特点的抗高血压药物[6-8]。但同时，利血平能够诱发帕金森综合征和抑郁症[9-10]。研究表明，利血平能够促使人神经母细胞SH-SY5Y 的凋亡和诱导自噬损伤，引发α-synuclein 蛋白聚集体，并能影响Ddc-GAL4 果蝇的运动能力[11]。利血平作为单胺类抑制剂，可治疗运动机能亢进，已被广泛用于亨廷顿舞蹈症的抽动症[12]。结合利血平对神经系统疾病的影响，本研究探讨利血平在SCA3 致病过程中对一系列细胞水平病理变化的影响，分析最早期的病理变化ataxin-3 核质转运，观察可溶性ataxin-3 蛋白水平以及ataxin-3 形成的包涵体数量，检测SCA3 细胞活性，进而阐明利血平对SCA3 细胞模型的影响，揭示老药新用的药理作用，为临床用药提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 药物和试剂

    利血平(批号83580)、阴性对照DMSO 溶剂(批号32160405)均购自Sigma-Aldrich 公司。β-半乳糖苷酶抗体(β-gal ......