蒙艳丽，孙一，雷敏瑞，姜焱，王萍，王晓溪，王欣，王伟明

    黑龙江省中医药科学院，黑龙江 哈尔滨 150036

    肺炎是影响全球儿童健康的一个公众问题，随着肺炎相关疫苗的应用，肺炎的常见病原谱正在发生变化，肺炎支原体(MP)已成为社区获得性肺炎的最常见病原之一，占社区获得性肺炎的10%～40%，在部分封闭人群中可高达70%。近年来，我国北方地区MP 感染的发病率在不断增加，每2～3 年有1 次流行，流行季节多在秋冬季[1]。

    社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(CARDs TX)蛋白被认为是目前为止肺炎支原体体内单一的毒力因子[2]，是由肺炎支原体MPN372 基因编码的蛋白，在肺炎支原体的致病过程中起到了至关重要的作用[3]。CARDs TX 能够引起多种炎症因子释放，导致相关组织病理的改变[4]。此外，CARDs TX 作为一种可溶性的炎症触发因子，在MP 感染控制稳定一段时间后仍具有激发气道神经源性炎症的功能[5]，如缓激肽及其缓激肽受体，可引发患者剧烈咳嗽。目前的临床用药常选用阿奇霉素等大环内酯类抗生素，由于临床不规范化及反复使用，导致肺炎支原体耐药性剧增，中国尤为突出，耐药率接近90%[6-7]，使其临床应用受到限制。无痰而剧烈的干咳往往需镇咳药缓解症状，但镇咳药主要为中枢性镇咳药(可待因、吗啡、右美沙芬等)、周围性镇咳药(那可丁、苯丙哌林)等，属特殊药品，有成瘾性或较大不良反应，儿童不宜服用[8]。因此，开发既能杀灭肺炎支原体又能治疗其感染引起干咳的药物是临床的迫切需求。

    芩百清肺浓缩丸是国家批准的第1 个用于小儿肺炎支原体肺炎治疗的中药，已完成Ⅲ期临床，前期作为医院制剂用于临床10 余年，疗效确切，患儿咳痰喘等症状能够快速缓解，避免了抗生素不良反应及耐药性，是黑龙江省呼吸科应用量最大的医院制剂。本研究通过验证芩百清肺浓缩丸对CARDs TX、缓激肽受体B2(BDKRB2)表达的影响，探讨芩百清肺浓缩丸减缓患者咳嗽治疗肺炎支原体肺炎的作用机制，为芩百清肺浓缩丸的临床使用提供理论依据。

    1 材料与仪器

    1.1 菌株与质粒

    肺炎支原体菌株(批号ATCC15531)购自美国Type Culture Collection 公司，大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、pET28α 质粒由本实验室保存。

    1.2 主要药品和试剂

    LB 培养基购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司；卡那霉素(批号2021/12)购自索莱宝公司；还原型谷胱甘肽(批号2021/12)、氧化型谷胱甘肽(批号2021/12)、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)(批号410H052)、溶菌酶(批号2020/12)购自北京博奥拓达科技有限公司；胎牛血清(批号11011-8611)购自浙江天杭生物科技股份有限公司；RT-PCR 试剂盒(批号15322、17122)购自江苏康为世纪生物科技有限公司 ......