田 媛， 杨延周， 秦 天， 俞晓丽， 王燕蓉， 裴秀英

    (宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室，宁夏回族自治区生殖与遗传重点实验室，宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学学系，银川 750004)

    卵巢冷冻及移植技术已经成为肿瘤生育领域研究的热点之一，并且也是保护青春期前女性生育功能的唯一途径。然而卵巢冻存过程的冷冻损伤、卵泡发育延迟及卵泡凋亡[1]，移植后无血管吻合缺血缺氧的状态，造成大量卵泡的破坏损伤[2]。由垂体分泌的卵泡刺激素(FSH)主要促进卵泡发育及成熟。本课题组前期结果表明[3]，卵巢玻璃化冻存过程中添加0.3 IU·mL-1FSH，可以提高血管生成相关因子表达，缩短卵巢移植后血流重建的时间，抑制卵泡闭锁。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate，S1P)是细胞膜鞘磷脂的代谢产物，调节细胞增殖分化、血管形成[4]，可作为主要的血管生成刺激物[5-6]，减少卵巢移植后缺血再灌注损伤从而提高卵子质量[7]，并且2 μmol·L-1S1P 对冻融卵巢移植物原始卵泡的完整性有显著影响[8]。S1P 半衰期非常短，使其保护作用不能维持。有研究显示[5]，FSH 上调卵巢S1P的生成，是否FSH 联合S1P 能更好地保护冻存卵巢结构与功能尚不清楚，本实验将以0.3 IU·mL-1FSH 及2 μmol·L-1S1P 为基础，通过不同浓度的FSH 联合2 μmol·L-1S1P 或0.3 IU·mL-1FSH 联合不同浓度的S1P 作用于小鼠卵巢玻璃化冻存过程，筛选FSH 联合S1P 的最适干预浓度，为保护冻融卵巢组织、提高卵巢移植后存活率提供科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    1.1.1 实验动物 选取21 日龄清洁级ICR 雌性小鼠，均购自宁夏医科大学实验动物中心[许可证号：SCXK(宁)2015-0001]，光照时间周期为12 h照明/12 h 黑暗，动物室室温保持在(24±2)℃，湿度保持在40%～50%，并定期更换鼠笼、水粮、垫料并消毒。

    1.1.2 主要试剂 注射用重组人促卵泡刺激素(rhFSH，默克雪兰诺-果纳芬)，1-磷酸鞘氨醇(S1P)(sigma-S9666)，牛血清白蛋白(纯度≥96%)(Sigma A1933)，DMSO(MP Biomedicals-196055)，DeadEndTMFluorometric TUNEL 检测试剂盒(Promega-G3250)，DAPI 溶液(Solarbio -C0065) ......