杨婷婷， 王雅蓉， 战仕胜， 贾琴琴， 王秀青

    (宁夏医科大学临床医学院，银川 750004)

    肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤，每年诊断出新病例超过180 万，总体生存率很低，只有约15%的患者在初次诊断后5 年内存活[1]，而普通的外科手术切除治疗、放化疗并不能减少肺癌的发生率[2-3]。因此，探讨肺癌的发生发展规律对肺癌的治疗具有重大意义。细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)是丝裂原活化蛋白激酶家族的一个亚族，是一种传递丝裂原信号转导蛋白，其所参与的信号通路与大部分肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡相关[4]。ERK 序列和结构呈现一个高度保守的状态。ERK的特征在于其激活主要由TEY 残基发挥作用，在生长因子及药物多肽等刺激作用下将信号由细胞外传递到核内，从而调控细胞生理活动。ERK/CJUN 氨基末端激酶(C-JUN nterminal kinase，JNK)信号通路是细胞内调控肿瘤细胞增殖与凋亡的重要通路，其异常激活调控着细胞的凋亡、增殖与分化[5]。以往研究ERK 功能及相关机制采取瞬时转染，考虑到ERK 外源基因在肺癌中高表达等问题不利于研究ERK 活性在肺癌细胞增殖中的具体机制，本研究旨在通过对ERK 进行稳定过表达，探究ERK 过表达后对细胞增殖、侵袭和迁移以及ERK/JNK 通路中相关蛋白的影响，以期为后续研究肿瘤发展相关的信号通路奠定一定基础。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与试剂

    人肺腺癌细胞系A549 来源于宁夏医科大学总医院干细胞研究所；PCDH 载体购自美国SBI公司；大肠杆菌菌株DH5α、293T 细胞株购自天根生化科技有限公司；EZNA Total RNA KITI 购自OMEGA 公司；细胞培养试剂RPMI1640、胰蛋白酶、双抗均购自美国Gibico 公司；限制性内切酶NotI 和XbaI、T4 DNA 连接酶购自美国NEB 公司；去内毒素小量提取试剂盒、大量质粒提取试剂盒、琼脂糖凝胶DNA 回收试剂盒购自天根生化有限公司；Protoscript II first strand cDNA 合成试剂盒、Q5 hot start 高保真聚合酶购自NEB 公司；脂质体转染试剂Lipo-3000 购自美国Invitrogen公司；引物及测序由上海生工有限公司完成；P-ERK、ERK、P-CMYC 等单克隆抗体购自Abcam 有限公司。倒置荧光显微镜购自日本Olympus公司；电泳仪、免疫印迹实验转膜仪购自北京市六一仪器厂；PCR 仪购自美国ABI 公司；高压蒸汽灭菌器购自日本TOMY 公司；Multiskan GO 全波长酶标仪购自美国Thermo Fisher 公司；凝胶成像仪购自美国Bio-rad 公司 ......