锁志刚，丁惠强，费 乐，黑 龙，戈朝晖，马宗军，陈霄雷

    (宁夏医科大学总医院脊柱骨科，银川 750004)

    脊髓损伤可分为原发性损伤和继发性损伤。继发性损伤是可逆的，在脊髓损伤的治疗中占主导作用。研究证实[1]，Caspase-1抑制剂是Caspase-1不可逆和可渗透细胞的特异抑制剂。本研究采用改良的Allen's重物打击法建立大鼠脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)模型，通过HE染色、免疫组织化学法检测观察Caspase-1抑制剂在SCI后对大鼠Caspase-1、白细胞介素(IL)-1β和IL-18表达的抑制作用，以期为继发性脊髓损害后靶点抑制作用提供新的实验基础。

    1 资料与方法

    1.1 实验动物与分组

    成年雄性SD大鼠72只(由宁夏医科大学实验动物中心提供)，体质量250～300 g，随机分为对照组、SCI组、AC.YVAD.CMK组、甲基强的松龙(methyl prednisolone，MP)组，每组18只，SCI组、AC.YVAD.CMK组及MP组大鼠均应用改良的Allen's重物打击法建立大鼠脊髓损伤模型，正常对照组大鼠只做全椎板切除。4组大鼠依据损伤后取材时间(分别于术后24 h、72 h、7 d处死)再各分3个亚组，每个亚组6只。

    1.2 主要试剂

    Caspase-1抑制剂：AC.YVAD.CMK购自MC公司；二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自Tiangen公司；甲基强的松龙购自PfizerMamu facturingBelgiumNV公司；兔抗大鼠Caspase-1多克隆抗体、兔抗大鼠IL-l8多克隆抗体、IL-1β多克隆抗体、过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。

    1.3 大鼠脊髓损伤模型制作及各组给药

    大鼠实验前常规禁食8 h，实验顺序随机。选用30 g·L-1的戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，麻醉成功后，将大鼠固定于手术台，常规背部剃毛、消毒铺巾。无菌条件下取腰背部正中切口，逐层分开显露T8～T10椎板，行T9全椎板切除，显露硬脊膜并使之保持完整，钳夹固定T8及T10棘突，用直径2.5 mm、质量10.0 g的不锈钢棒沿带有刻度的玻璃导管从25 mm高处垂直下落 ......