王治兵，徐秋燕，王宝宏，张艳冰，曹露莹，马 凯，侯绍章，董俭达

    (1.宁夏贺兰县人民医院，贺兰 750200；2.宁夏医科大学临床学院，银川 750004；3.宁夏医科大学基础医学院病理学系，银川 750004)

    中国是目前糖尿病患者最多的国家[1]。我国因慢性创面住院的患者，其中糖尿病相关创面达32.6%[2]。早期发现糖尿病慢性难愈创面的危险因素，积极干预急性创面延迟愈合(delayed wound healing，DWH)的问题，对预防糖尿病足等慢性难愈性创面的发生具有关键作用[3-4]。再上皮化障碍(re-epithelialization disorder，RED)是DWH的关键事件，与DWH恶化及慢性难愈性创面发生密切相关[3-4]。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是细胞内重要的能量感受器，在糖尿病发生和发展中具有重要作用[5]。有研究[6]发现AMPK的激活剂二甲双胍对糖尿病创面愈合有促进作用，其机制尚不清楚。本研究通过建立高血糖大鼠模型，制备大鼠皮肤急性创面，利用二甲双胍局部处理创面，动态观察AMPKα其创面再上皮化(re-epithelialization，RE)区角质形成细胞(KCs)中的表达，为糖尿病创面DWH的机制研究提供实验线索，为糖尿病创面临床治疗提供潜在的靶点。

    1 资料与方法

    1.1 材料及仪器

    雄性Sprague Dawley(SD)大鼠30只，体质量150～160g，由宁夏医科大学实验动物中心提供[Ⅰ级动物，合格证编号SCXK(N)2015-0001]。链脲佐菌素(STZ，Sigma公司，美国)，盐酸二甲双胍肠溶片(批号：148880484；天安药业股份有限公司)，血糖测试仪(博仕珑，GLM-7911W，中国)，皮肤取样器(皮肤环钻，直径5 mm，Acuderm公司，美国)，小鼠单克隆IgG2a(kappa轻链)AMPKα1/2抗体(克隆号：D-6；Santa Cruz公司，美国)，ABC试剂盒为VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit(Peroxidase，Mouse IgG)(PK-6102)，ImmPACT DABPeroxidase(HRP)Substrate(SK-4105)，均购自美国Vector Laboratories公司，苏木素-伊红试剂(DH0006，Leagene公司，中国)。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组和高血糖大鼠制备 实验大鼠随机分为正常血糖对照组(NC)、高血糖组(DC)、高血糖二甲双胍干预组(DM) ......