刘 圆，张 辉，马胜超，李桂忠，姜怡邓

    (宁夏医科大学基础医学院，宁夏血管损伤与修复研究重点实验室，国家卫健委代谢性心血管疾病研究重点实验室，银川 750004)

    动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)[1]是一种发生于大中型动脉的慢性疾病，是各类缺血性心脑血管疾病的病理学基础，其发生机制复杂，目前存在多种假说，内皮细胞功能障碍作为As发病的初始和必要步骤获得大多数学者认可。同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是体内蛋氨酸代谢过程中形成的一种含硫氨基酸，属于蛋氨酸循环的中间产物[2]。本课题组前期研究[3]表明，Hcy可导致内皮细胞凋亡，但其具体机制尚不明确。长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)[4]是一类长度超过200 nt，无编码能力的转录产物。lncRNA可以在表观遗传修饰水平、转录水平和转录后水平等多个层次调控基因表达[5-6]，从而在细胞分化、增殖、凋亡、迁移和多能干细胞再生等多个生理过程中起到重要作用。lncRNA DINO作为lncRNA的一员，在癌细胞的迁移、凋亡[7]中发挥重要作用，但其在Hcy致内皮细胞凋亡中的作用尚不明确。本文旨在明确lncRNA DINO在Hcy诱导内皮细胞凋亡中的作用，为As的治疗提供理论基础及实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)(中国，名劲生物技术有限公司)；Hcy(美国，Sigma公司)；胎牛血清、DMEM培养基(澳大利亚，Gibco公司)；青链霉素、胰蛋白酶消化液、NP-40(中国，碧云天生物技术研究所)；细胞活力荧光测定试剂盒(瑞士，Roche公司)；苯甲基磺酰氟(PMSF)蛋白酶抑制剂(中国，北京索莱宝科技有限公司)；Bax抗体、Bcl-2抗体(英国，Abcam公司)；β-actin抗体、辣根过氧化物酶标记的二抗(中国，北京金桥有限公司)；脱脂奶粉(美国，BD公司)；cDNA试剂盒、RTqPCR试剂盒(日本，Takara公司)；Lipo2000(美国，Thermo Fisher公司)；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(上海，Best bio公司)；引物由上海生工有限公司合成；lncRNA DINOsiRNA、si-NC由湖州河马科技有限公司构建。

    1.2 仪器与设备

    超净工作台(苏州，安泰)；CO2培养箱(德国 ......