武彦虎，丁向春，王 钊，冯薛烟，汪彭涛，海 龙

    (1.宁夏医科大学，银川 750004；2.宁夏医科大学总医院感染疾病科，银川 750004；3.宁夏医科大学总医院病原微生物实验室，银川 750004)

    肝纤维化主要由慢性病毒性乙型或丙型肝炎、自身免疫性疾病、胆道疾病、酒精性脂肪性肝炎和越来越多的非酒精性脂肪性肝炎引起的一种肝内慢性可逆性损伤修复反应[1]。肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化发生发展的主要效应细胞，HSC的激活与增殖分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成，肝内细胞外基质的过度积累，如果得不到有效治疗，最终可导致严重的肝衰竭及各种终末期肝脏疾病[2]。miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，通过与靶基因miRNA序列3'末端非翻译区(3'UTR)互补配对，阻止其蛋白质翻译而起到转录后抑制作用[3]。miRNA在生长发育、细胞分化、增殖、凋亡、肿瘤发生等过程中发挥重要作用，研究[4]表明，miRNA通过调控靶基因及其相关信号通路，在HSC活化、肝纤维化相关细胞的调控以及肝纤维化发生发展中都起到了极其重要的作用。miR-519d-3p是一种新发现的具有肿瘤抑制作用的miRNA，近期研究发现，miR-519d-3p在肝星状细胞活化过程中的表达异常，本研究通过体外转染技术，将miR-519d-3p模拟物及其抑制剂转染LX-2细胞(人肝星状细胞系)，探讨miR-519d-3p对HSC活化和凋亡的影响，为抗肝纤维化的治疗提供新的思路。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与材料

    Dulbeccos Modified Eagle Medium(DMEM培养基)(美国Gibco公司)；胎牛血清(美国Gibco公司)；胰蛋白酶消化液(美国Gibco公司)；细胞全蛋白提取试剂盒、BCA试剂盒(凯基公司)；异丙醇、甲醇、乙醇、脱脂奶粉(BD公司)；PVDF膜(Milipore Corporation)；SYNERGY2型 酶 标 仪(美国BioTek公司)；实时荧光定量PCR系统(Roche公司)；Lipofectamine RNAiMAX转染试剂(Invitrogen公司)；RNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司]；逆转录试剂盒(Thermo公司)；SYBR染色法实时荧光定量PCR试剂盒(TaKaRa公司)；引物(Sangon Biotech公司)；miR-519d-3p模拟物、抑制物及阴性对照序列(上海吉玛制药技术有限公司) ......