李梦琪，焦龙杏，郭嘉欣，尚 静，徐远义，黄允宁

    (1.宁夏医科大学基础医学院病理学系，银川 750004；2.宁夏回族自治区人民医院胃肠外科，银川 750001)

    胃癌是全球最常诊断的癌症之一[1]。转移是胃癌高病死率的主要原因，而肿瘤细胞发生上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)是肿瘤转移的分子机制之一[2]。目前胃癌的治疗以手术和化疗为主[3]，但效果并不理想。因此，开发有效的抗肿瘤药物抑制人胃癌细胞的侵袭、迁移和EMT对胃癌的治疗具有重要意义。硫酸右旋糖苷(dextran sulfate，DS)是一种带有硫酸根的多糖，具有腹腔吸收缓慢，作用时间持久的特点。课题组前期研究发现该分子质量的DS可以抑制人胃癌细胞的增殖和粘附，并减少腹腔种植转移[4]。然而，其发挥作用的分子机制还需进一步探究。高迁移率族蛋白AT2(HMGA2)是一种结构转录因子，属于高迁移率族蛋白家族成员之一。据The Human Protein Atlas数据库分析HMGA2在肿瘤中高表达，并且在胃癌患者组织中呈现高表达状态。有文献[5-6]研究显示，前列腺癌、食管鳞状细胞癌中HMGA2与肿瘤细胞发生EMT密切相关。β-catenin是Wnt信号通路的关键因子，研究表明，在视网膜母细胞瘤中microRNA-98通过介导Wnt/β-catenin途径靶向HMGA2抑制视网膜细胞瘤的迁移和侵袭[7]。因此，探究以HMGA2/β-catenin为靶点的研究，对胃癌的治疗具有积极的意义。本研究通过体内外实验，探讨DS是否可以影响人胃癌细胞HMGA2/βcatenin的表达并抑制人胃癌细胞侵袭、迁移和EMT。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 人胃癌标本 收集宁夏回族自治区人民医院2018年10月至2019年10月经手术切除、术后病理确诊为胃腺癌的组织标本24例，所有患者术前均未接受放疗及化学药物治疗。

    1.1.2 细胞与动物 人胃癌细胞株HGC-27，由哈尔滨医科大学肝脾外科实验室蒋寒冰赠予。BALB/c裸鼠购自北京维通利华实验动物科技有限公司[动物牌照号SCXX(Jing)2006-0009]，5～6周龄，雄性，体质量18～22 g。在宁夏医科大学实验动物中心SPF条件下饲养，实验步骤已通过宁夏医科大学实验动物福利伦理审查委员会批准。1.1.3药物与试剂DS分子质量500000 Da，购自美国Sigma公司。HMGA2、β-catenin、E-cad单克隆一抗均购自美国Cell Signaling Technology公司；N-cad一抗购自中国博奥森公司；β-actin抗体、山羊抗兔和鼠二抗均购自中杉金桥技术有限公司；胎牛血清购自Bioind公司；RPMI-1640培养基购自美国Hyclone公司；兔二步法检测试剂盒(PV-9001)购自北京中杉金桥生物技术有限公司；全蛋白提取试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒、ECL化学发光试剂盒购自江苏凯基生物技术有限公司；Transwell小室购自美国Corning公司；电泳转膜系统购自美国Bio-Rad公司；反转录及实时荧光定量(RT-qPCR)试剂购自TaKaRa公司；青链霉素混合液购自北京索莱宝公司；引物由上海生工合成 ......