付 江，刘敬莉，柳科军，，段 磊，蒲 俊，卜 阳，4

    (1.湖北省孝感市中心医院神经外科，孝感 432000；2.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004；3.宁夏医科大学总医院肝胆外科，银川 750004；4.宁夏回族自治区人民医院肝胆外科，银川 750002)

    肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)(简称肝癌)目前居于恶性肿瘤发病率第5位，病死率居第3位[1]。肝癌术后易复发，且对转移缺乏有效治疗手段，最终多死于复发转移。临床证实肝癌对分子靶向药物(索拉非尼等)反应不佳，患者生存获益率有限。免疫检查点阻断剂是近年发展最迅速的免疫治疗手段，主要以PD1/PDL1和CTLA4作为治疗靶点，通过恢复受抑制的T细胞功能达到杀伤肿瘤的作用[2]，然而研究发现肝癌抗PD-1应答率不到20%[3-4]。因此，从传统中药中寻求综合治疗策略，是精准医学时代背景下提高肝癌生存获益率的重要策略之一[5-6]。银杏叶提取物(ginkgo biloba extract，GBE)是目前临床使用较广泛的中药材之一，其中起主要作用的是黄酮类以及萜内酯类等化合物[7-8]。近年研究证实GBE是血小板活化因子(platelet activating factor，PAF)特异性受体拮抗剂，竞争性抑制PAF与其受体结合发挥作用[9]。然而，GBE与PAF表达水平的关系及其对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响尚不明确。因此，本研究拟检测GBE含药血清中PAF水平，进而探讨GBE含药血清对肝癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及相关机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    GBE制剂(3.5 mg·mL-1)购自悦康药业集团有限公司；兔抗人E-cadherin、Vimentin、Snail和PCNA抗体均购自美国Abcam公司；鼠抗人βactin购于武汉Proteintech公司；HRP标记山羊抗兔/鼠IgG二抗、PAF小鼠酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒、DMEM高糖、TRYPSIN 0.25%EDTA、苏木素-伊红染色剂，吉姆萨染液均购自上海威奥生物科技有限公司；Transwell小室购自于美国Corning公司；CCK8细胞增殖检测试剂盒购自日本同仁。

    1.2 GBE含药血清的制备

    BALB/c nu裸鼠：雄性，4～6周龄，购自宁夏医科大学实验动物中心，裸鼠适应性饲养7 d，将裸鼠随机分为GBE组[GBE 1 mg·(kg·d)-1 ......