王 丽，梁 军，张 炜，黄 菱，万巧凤

    (1.宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系，银川750004；2.宁夏医科大学药学院，银川750004)

    中药黄芩富含多种黄酮类化合物，如黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等，其中黄芩苷是其主要活性成分，具有消炎[1]、抗氧化等[2]多种生物学作用，迄今为止，有关黄芩苷修复损伤方面的研究鲜有报道。因前期研究发现黄芩苷对流感病毒致肺损伤小鼠具有良好的保护作用[3]，所以本研究拟以人胚肺成纤维细胞(MCR-5)为研究对象，以诱导细胞损伤具有显著作用的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)为诱导剂，旨在进一步探讨黄芩苷修复细胞损伤的作用及可能分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞

    MCR-5购自北纳创联生物科技研究院。

    1.2 药品

    黄芩苷购自南京春秋生物工程有限公司，批号21967-41-9，纯度大于98%，用RPMI 1640不完全培养基(含1/1000 DMSO)将其配制成1 g·L-1的母液，用0.22 μm的滤器过滤除菌，分装后保存于-20℃。

    1.3 试剂

    TNF-α(Cyagen，货号HETNP-01011)；β-半乳糖苷酶染色试剂盒(碧云天，货号C0602)；微小RNA(miRNA)提取试剂盒(QIAGEN公司)；miRNA反转录试剂盒(ABI公司)；Trizol(Invitrogen公司)；Real-time PCR扩增试剂盒(Roche公司)；沉默信息调节因子1(SIRT1)兔抗人抗体(EPitomics，货号3894-1)；周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)鼠抗人抗体(Abcam，货号ab54576)；蛋白质分子量Marker(Bio-Rad，货号161-0374)；HRP标记山羊抗兔IgG二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司，货号ZB-2301)；GAPDH一抗(Abcam，货号ab8245)；Western blot其他试剂由本室配备 ......