马 钊，田春花，杨梅芳，吴 阳，金 秋，马鸿云

    (1.宁夏回族自治区人民医院，西北民族大学第一附属医院，北方民族大学合作办学医院，银川750002；2.宁夏回族自治区银川市妇幼保健院，银川750002)

    子宫内膜癌(endometrial cancer，EC)是女性生殖系统恶性肿瘤之一，发病率、病死率居女性恶性肿瘤首位，且呈年轻化趋势，约14%的患者发病时处于育龄期，其中约70%的患者仍有生育意愿[1-4]。以孕激素为基础的保育治疗方案为年轻且有生育要求的EC患者提供了临床选择[5-7]。但约有30%的患者对孕激素治疗产生耐药，这与孕激素激活磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路产生孕激素抵抗有关[8-9]，也为年轻早期EC患者保留生育功能治疗带来困难[10]。研究[11-13]发现，微小RNA(miRNA)参与EC的发生、发展。韩振坤等[14]发现，在EC组织中miR-21呈高表达，且与癌组织的恶性程度呈正相关，这与Lai、王淑芳等[15-16]研究结果一致。因此推测，拮抗miR-21表达可能具有抑癌作用。文章旨在探究miR-21拮抗剂联合左炔诺酮对EC Ishikawa细胞增殖与凋亡的影响，为年轻早期EC患者制订保留生育功能治疗的新方案提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞

    本实验使用人EC细胞株Ishikawa，细胞株购买自北纳生物公司(BNCC338359)。

    1.2 试剂与仪器

    完全DMEM培养基(KGM12800S-500，凯基生物)；Lipofectamine ? 3000 Transfection Reagent(L3000015，invitrogenTM)；miR-21拮抗剂(中洪博元分子实验室提供)；左炔诺孕酮(LNG)(S1727，Selleckchem)：50 mg HCY干粉中加入1.6 mL DMSO溶解，得100 mmol·L-1母液，-20℃分装保存，根据实验需求剂量进行稀释；CCK-8法细胞增殖检测试剂(KGA317，凯基生物)；Anti-PTEN antibody[EPR9941-2](ab170941，Abcam)；辣根酶标记二抗[山羊抗兔IgG(H+L)(亲和纯化)(ZB-2301)中杉金桥]；DAB显色试剂盒(CW0125，CWBIO康为世纪)；中性树脂(CW0136，CWBIO康为世纪)；苏木素染色(AR1180-1 ......