朱玲勤，胡小辉，高媛媛，薛姝婧，李光华，

    (1.宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 700004；2.宁夏医科大学基础医学院生理学系，银川 750004)

    Keap1/Nrf2信号通路在机体抗氧化应激过程中具有很好的保护作用，它的激活可以使机体的氧化与抗氧化系统保持动态平衡状态。不仅如此，有研究表明[1-3]，Keap1/Nrf2信号通路的激活还可在机体抗肿瘤、抗凋亡、抗炎症反应以及神经系统保护等方面发挥重要作用。但过度的氧化应激会使机体的抗氧化与氧化系统的调控失衡，致机体的内稳态遭到破坏，氧化应激对机体组织细胞的损伤作用会明显增加。

    枸杞作为一种食药两用的传统中药，其自身具有润肺止咳和养肝明目等功效。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide，LBP)是从枸杞子中提取的活性成分，研究[4-9]表明，LBP具有多种药理和生物活性，如抗炎、抗氧化、抗凋亡、免疫调节和其他药理作用。本课题组前期研究[10]结果表明，力竭运动会导致大鼠胸主动脉血管内皮细胞(RTAEC)损伤增加、血管顺应性降低，而LBP对大鼠胸主动脉内皮细胞损伤有一定的保护作用，但其发挥保护作用的机制如何，成为本研究的重点内容及创新点。本研究旨在探讨LBP是否通过增强心血管内皮细胞中Keap1/Nrf2抗氧化应激信号通路的表达，提高心血管内皮的抗氧化能力，改善机体的氧化应激状态，进而达到保护心血管系统的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器

    RTAEC购自上海赛齐生物工程有限公司；siRNA及荧光siRNA转染试剂盒(广州锐博生物科技有限公司)；LBP(纯度90%，宁夏启元药业)；血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、ELISA试剂盒(武汉云克隆科技股份有限公司)；酶标仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)；电泳仪(美国Bio-Rad公司)；化学发光成像仪[美国通用电气公司(GE)]。

    1.2 细胞转染

    应用小干扰RNA[siRNA(50 nmol)]转染大鼠胸主动脉内皮细胞，沉默RTAEC中的Nrf2基因。

    1.2.1 转染效率的检测 荧光标记的siRNA是检测转染效率、优化转染方法最常用的一种方法，按照使用说明将产品配制成20μmol的储存液，由于荧光易于衰减，整个过程在黑暗的环境中进行。在LP2000的协助下转染带有荧光标记的siRNA(50 nmol)于内皮细胞中。具体步骤如下：(1)按照细胞传代的方法制备单细胞悬液，全自动细胞计数仪进行细胞计数 ......