陈德胜，张 晨，刘子歌，宋国瑞，郭凤英，李 燕

    (1.宁夏回族自治区人民医院骨科，银川 750002；2.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004；3.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004)

    人工关节置换术作为关节终末期疾病和老年股骨颈骨折的有效治疗手段，明显提高了患者的生活质量[1-2]。在术后15～20年，10%～15%的患者因各种因素造成无菌性松动，最终导致人工关节失效，需采取人工关节返修术。人工关节产生的磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解是引起人工假体松动的首要原因，直接影响人工假体的使用寿命。有研究[3-4]证实，磨损颗粒在关节间隙大量积聚。界膜巨噬细胞被磨损颗粒激活后释放了大量强效溶骨细胞因子和炎性介质，包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶(MMP)等。这些细胞因子主要通过信号转导通路，诱导破骨细胞形成与活化，并刺激巨噬细胞和破骨细胞引起邻近骨质吸收、骨重建紊乱。

    随着人们对人工假体周围骨溶解发病机制的进一步了解，使得药物预防人工假体周围骨溶解成为可能。近期研究[5-6]发现，p38MAPK不仅参与骨重建的调节，还与炎性反应有关。本文以小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究对象，以钛(Ti)颗粒为研究因素，以p38MAPK信号转导通路为作用靶点，探讨p38MAPK选择性抑制剂SB203580在无菌性松动中的潜在治疗和预防价值。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    磨损颗粒选用Ti颗粒，购自Alfa Aesar公司(Ward Hill，MA)，要求颗粒直径<20 μm。小鼠RAW巨噬细胞株购自中国科学院上海细胞所，内毒素检测试剂盒购于厦门市鲎试剂实验厂有限公司，四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)和酶联免疫法(ELISA)试剂盒均购自美国Sigma公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 磨损颗粒的内毒素去除处理并检测 在干燥箱内180℃将Ti颗粒焙烤6 h，浸泡于70%乙醇，然后以2 000 r·min-1速度离心15 min，沉淀出Ti颗粒。多次循环操作，再加入PBS洗涤、离心、干燥，通过紫外线持续照射，消毒处理颗粒，加入无菌PBS，制成浓度为300 mg·mL-1的Ti颗粒悬液，4℃保存备用。Ti颗粒悬液加入内毒素检测试剂，全部标本恢复到室温，根据标准品吸光度测量结果绘制标准曲线，然后计算每个样品内毒素含量。Ti颗粒去除内毒素处理。

    1.2.2 小鼠RAW264.7巨噬细胞系复苏与培养 从医用液氮罐中取出小鼠RAW264.7巨噬细胞株冷冻管放入38℃水浴中 ......