郎艳芝， 王 雷， 李 娜， 杨 文， 冉林武，

    (1.宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 750004； 2.宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室，银川 750004；3.宁夏医科大学实验动物中心，银川 750004)

    血管内皮细胞是构成动脉、静脉和毛细血管的一层单层内皮细胞，是血液和组织之间的天然屏障[1]。血管内皮细胞损伤与高血压、糖尿病、冠心病、心肌病、动脉粥样硬化等多种疾病的病理过程密切相关[2]。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，oxLDL)能够诱导血管内皮细胞氧化应激，降低细胞抗氧化能力，引起血管内皮细胞氧化损伤[3]。目前，通过降低氧化应激改善血管内皮细胞功能，已成为预防和治疗心血管疾病的一种策略[4]。硒是人体必需的微量元素之一，流行病学发现硒具有预防心血管疾病的功效[5-6]。硒主要通过硒蛋白发挥抗氧化作用，进而起到保护血管内皮细胞的功能。但硒浓度变化如何影响硒蛋白的生物学功能，特别是对心血管系统的影响，仍有待进一步研究。本文以人脐静脉内皮细胞(EA.hy926 细胞)为研究对象，观察不同硒浓度对oxLDL 诱导EA.hy926 细胞氧化损伤的保护作用，探讨血管内皮细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)1 和GPx4 的作用。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    EA.hy926 细胞购自上海科学院细胞库；亚硒酸钠(Na2SeO3)购自西亚试剂；oxLDL 购自广州奕源生物科技有限公司；高糖型DMEM 培养基、胎牛血清购自美国Gibco 公司；青霉素链霉素双抗、0.25%胰蛋白酶消化液购自北京Solarbio 公司；磷酸盐缓冲液购自美国Hyclone 公司；MTT细胞增殖检测试剂盒、全蛋白提取试剂盒、BCA蛋白定量检测试剂盒、SDS-PAGE 凝胶试剂盒均购自南京凯基生物科技发展有限公司；活性氧(ROS)检测试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒购自南京建成生物工程公司；总GPx 检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；β-Actin 抗体购自北京中杉金桥公司；GPx1 抗体购自美国Santa Cruz 公司；GPx4 抗体购自美国Abcam 公司；JC-1 检测试剂盒、HRP 标记山羊抗兔IgG 抗体、HRP 标记山羊抗鼠IgG 抗体购自美国Abbkine 公司；ECL 发光液购自美国Thermo 公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养 EA.hy926 细胞培养于DMEM高糖完全培养基(含10%胎牛血清和1%青霉素链霉素双抗)中 ......