王秋实， 孙 岳， 刘太阳， 宝 瑞， 郝 玮， 刘耀阳，李媛媛， 畅思容， 王 梦， 刘志宏

    (1.宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 750004； 2.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室，银川 750004)

    随着我国社会快速发展，职业病成为一个不容忽视的问题。2019年，在职业病人群中尘肺患者占90%以上[1]。尘肺是以肺组织弥漫性纤维化为主的疾病，目前临床上仍缺乏有效的治疗手段。因此，寻找有效治疗肺纤维化的药物是尘肺治疗的迫切需要。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)由分子质量分别为69 kD 的α 链和34 kD 的β 链以二硫键连接而成，是一种刺激肝细胞增殖的促有丝分裂因子，是目前已知最强烈的肝细胞增殖刺激因子[2]。HGF 在许多组织中局部表达，包括肺、肾和肝脏，并可以促进正常组织再生，防止肺、心、肾和肝的纤维化重塑[3]。HGF在调节炎性反应[4]和伤口修复能力[5]，减轻刺激诱导的上皮间质转化和Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡[6]，以及抑制肌成纤维细胞分化和细胞外基质的产生[7]中起关键作用。研究[8]表明，HGF 在肺损伤后升高。从受损肺中提取的支气管肺泡液中HGF蛋白水平升高[9]。尽管HGF 在组织损伤后增加，但在包括肺在内的几种组织中，HGF 在纤维化的发展和(或)进展过程中的表达与HGF 的表达呈负相关[3]。因此，在肺纤维化疾病的发生发展过程中，HGF 发挥了重要作用，并且可作为一个潜在的治疗靶点。

    目前，尘肺的发病机制尚不明确，且临床上缺乏有效的治疗措施来逆转尘肺纤维化病变或减缓病变的进展[10-11]。相较于传统治疗方法，基因治疗可通过导入正常基因或编辑修复缺陷基因，实现对疾病的根源性治疗。腺相关病毒由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低、在体内表达外源基因时间长等特点被视为最有前途的基因治疗手段，得到广泛应用。有研究[12]表明，AAV9 腺相关病毒在全身用药后在病毒基因组分布和蛋白表达方面更具优势。因此，本研究利用AAV9 腺相关病毒优势，构建过表达HGF 基因的AAV9 腺相关病毒载体，为后续HGF 在体内外的过表达研究提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 宁夏医科大学实验动物中心提供体质量为20～24 g、6～8 周龄C57BL/6 雄性小鼠 ......