陶宏宇， 孙 楠， 朱 珊， 申洪远， 米成嵘， 王福霞， 王 文

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004； 2.宁夏医科大学总医院超声科，银川 750004)

    乳腺癌是全球范围内女性最常见的恶性肿瘤之一[1]。作为最易发生淋巴转移的肿瘤，乳腺癌患者腋窝淋巴结分期对于后续的治疗及预后有着重要意义[2]。前哨淋巴结(sentinel lymph node，SLN)是原发肿瘤引流区的第一个或第一组淋巴结，目前临床多采用前哨淋巴结活检(sentinel lymph node biopsy，SLNB)来判定其病理状况，但其本身为有创检查并且操作难度较高[3]。近年来，超声造影(contrast-enhanced ultrasound，CEUS)作为一种无创且简便的检查手段，被越来越多地应用于乳腺癌淋巴转移的临床研究和动物实验中，通过注射超声微泡造影剂可获得淋巴结内微血管分布及灌注信息，从而对SLN 状态进行判断[4]。本研究构建了Balb/c 小鼠乳腺癌细胞足垫成瘤的腘窝淋巴结转移模型，观察比较腘窝淋巴结在常规超声以及经静脉注射造影剂后CEUS 的表现，探讨CEUS 在小鼠淋巴结转移模型中的诊断价值。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及细胞株

    健康Balb/c 小鼠50 只，均为雌性，鼠龄4周，体质量18～20 g/只，购于宁夏医科大学实验动物中心，在SPF 级环境中饲养。小鼠乳腺癌细胞株4T1，购于中国科学院上海细胞库。

    1.2 小鼠乳腺癌细胞4T1 的复苏与培养

    从液氮中将冻存的小鼠4T1 乳腺癌细胞取出，迅速放入37 °C 水浴锅中复苏，复苏后置于含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养基，在37 °C、5%CO2环境下进行体外培养增殖，培养皿中细胞长至80%密度则进行传代，细胞传代三代以上后取对数生长期细胞配制成肿瘤细胞悬液。

    1.3 构建Balb/c 小鼠腘窝淋巴结肿瘤转移模型

    小鼠适应性饲养1 周后进行实验，取对数生长期的4T1 细胞，加入PBS 溶液稀释，配制成浓度约为1×107个/mL 的肿瘤细胞悬液。实验前对每只小鼠进行耳标编号，消毒小鼠右后腿足垫皮肤，使用1 mL 注射器将肿瘤细胞悬液(约60 μL/只)注射入足垫皮下，隆起皮丘后缓慢退针。之后定期观察并记录小鼠体质量、足垫肿瘤生长情况以及同侧腘窝淋巴结肿大情况，肿瘤体积计算公式为：体积(mm3)=(长×宽2)/2，根据计算结果绘制肿瘤时间生长曲线 ......