张映驰， 吴梦宇， 李 洁， 单 婧， 史新琛， 徐海明

    (1.宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 750004； 2.宁夏回族自治区环境因素与慢性病控制重点实验室，银川 750004)

    矽肺是尘肺中进展最快、危害最严重的一种法定职业病，是我国职业病防治的重点及难点。该病是由长期吸入含有游离二氧化硅的粉尘引起，其病理特征为肺组织弥漫性纤维化和矽结节形成[1]。二氧化硅暴露可以导致职业人群及实验动物体内氧化应激失衡及炎性反应[2-4]。本课题组前期研究[5]表明，非神经元型胆碱能系统(nonneuronal cholinergic system，NNCS)关键分子乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase，AChE)在矽肺患者外周血血清中显著降低。另有研究[6]表明，NNCS系统与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)存在较为密切的关联。本研究以源于Ⅱ型肺泡上皮细胞的人源A549 细胞为体外细胞模型，观察二氧化硅暴露对该细胞内氧化应激指标、炎性细胞因子及NNCS 关键分子AChE酶活性和乙酰胆碱受体(CHRM5、CHRNA7 和CHRNA9)mRNA 表达水平的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养与分组

    在DMEM 基础培养基中加入一定体积分数的胎牛血清(10%)及青链霉素(1%)，将其作为A549 细胞的培养基。细胞于37 ℃、5%CO2培养箱中培养。使用含0.01% EDTA 的胰蛋白酶(浓度为0.125%)进行消化传代操作，传代频率为2～3 d/次。设置空白组(不接种细胞，只加相应体积的完全培养基)、对照组(二氧化硅0 μg·cm-2)及二氧化硅暴露组(1、2、4、8 μg·cm-2)，暴露时长为24 h。

    1.2 二氧化硅

    二氧化硅购自美国Sigma 公司(CAS：12173-28-3，孔径：6～11 nm，SSA：550～600 m2·g-1) ......