李 娟，马丽娜，刘帅伟，雒 夏，丁向春

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004；2.宁夏医科大学总医院感染性疾病科，银川 750004)

    乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)相关肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球严重威胁人类健康常见的恶性肿瘤之一。在癌症病死率中排第2位，在受影响较多的亚洲和非洲等地区，超过50%的肝癌病例与HBV感染有关[1]。在我国95%以上的HCC与HBV感染相关[2]，HBV引起全球约3亿例患者的感染流行[3]，每年有近90万人死于包括肝衰竭、HCC等HBV导致的并发症。C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)为组织损伤、炎症、感染相关的急性期反应蛋白，不但具有免疫调节功能，而且在肿瘤的发生、生长中起到重要的作用[4-6]。CRP可通过影响转录激活因子-3(STAT3)、核转录因子-κB(NF-κB)及干扰素相关基因的表达调控HBV的复制[7]，CRP还与血清乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)复制水平相关[8]，在HBV相关的HCC中，炎症因子CRP如何通过影响HBV复制进而影响HCC的发生进展，鲜有相关报道，这对进一步认识HCC的发生机制有重要的作用。

    HepG2是人肝癌细胞株，HepG2.215细胞是一种能稳定分泌HBV颗粒的人类肝癌细胞模型，常用于研究HBV复制机制，也是稳定转染困难且转染效率低的细胞模型。慢病毒载体具有目标基因转染效率高且对转染细胞影响较小的特点，因此，本研究利用HBV复制细胞模型HepG2.215，采用CRP基因过表达、沉默及突变慢病毒载体转染HepG2.215细胞技术获得HepG2.215稳定表达CRP细胞株，分析CRP对肝癌细胞中HBV复制的影响作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 肝癌细胞株HepG2和HepG2.215细胞(保存于宁夏医科大学总医院病原微生物实验室)。

    1.1.2 试剂及仪器 CRP过表达慢病毒载体及空载体、CRP沉默慢病毒载体及空载体、CRP突变慢病毒载体(上海吉玛制药技术有限公司)；RNAiso Plus(日本Takara公司)；FBS、DMEM培养基(美国Hyclone公司)；引物(合肥通用生物公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天公司)；逆转录试剂盒(日本Takara公司)；鼠抗人CRP单克隆抗体、鼠抗人GAPDH单克隆抗体、Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG(H+L)(美国Abcam公司)；HBVDNA检测试剂盒(杭州博日公司)；HBsAg、HBeAg ELISA试剂盒(中国恩必普公司)；乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)抗体(美国Abcam公司)；SDS-PAGE电泳仪(美国Bio-Rad公司) ......