刘耀阳， 孙 岳， 刘太阳， 郝 玮， 王秋实， 刘志宏

    (宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 750004)

    动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种以粥样斑块和纤维斑块形成为特征的慢性炎症性疾病[1]。《“健康中国2030”规划纲要》也指出AS是我国一项亟待解决的公共卫生问题。研究[2]表明，炎性反应参与AS 病变形成及进展过程，巨噬细胞作为炎性环境浸润的最主要的免疫细胞之一，在AS 斑块形成起始、进展、结局及斑块破裂等一系列过程中均发挥重要作用[3]。在斑块内微环境的作用下，巨噬细胞一般活化为经典活化型的M1 型以及替代活化型的M2 型，分别发挥致炎与抗炎的作用[4-5]。不同活化形式的巨噬细胞在能量代谢途径存在明显差异，M1 型活化过程中以糖酵解为主要供能途径，M2 型活化过程中以氧化磷酸化为主要供能途径。目前已证实巨噬细胞与代谢的关联[6]，它可能通过抑制巨噬细胞糖酵解，促进巨噬细胞氧化磷酸化，调控并维持不同亚群巨噬细胞活化[7]，减轻AS 病变。

    丙酮酸脱氢酶复合体(pyruvate dehydrogenase complex，PDHC)是定位在线粒体中的多酶复合物[8-9]，与细胞能量代谢相关，其中丙酮酸脱氢酶E1-α(pyruvate dehydrogenase E1-α，PDHA1)功能失调是导致PDHC 缺陷的主要原因[10]，PDHA1 表达水平的差异能够引起巨噬细胞代谢的变化，进而打破M1/M2 型巨噬细胞活化平衡，在巨噬细胞炎性反应中发挥十分重要的调控作用。载脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)基因敲除小鼠广泛应用于AS 动物模型及其并发症的研究[11-12]。因此，为深入研究巨噬细胞中PDHA1 对能量代谢的影响、对巨噬细胞的调控维持作用及在AS 发生、发展过程中发挥的作用和分子机制，本课题组拟利用Cre-Loxp 重组酶系统技术，构建并鉴定PDHA1 巨噬细胞条件性敲除小鼠和ApoE 基因敲除小鼠杂交的双基因敲除小鼠模型，以期为进一步探究巨噬细胞PDHA1 在动脉粥样硬化疾病发病中的作用及机制提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    实验动物为PDHA1loxp1/loxp1小鼠、ApoE-/-小鼠及特异性启动子驱动的Lyz2-Cre 工具鼠(均购自北京唯尚立德生物科技有限公司)。所有小鼠均在宁夏医科大学实验动物中心层流动物房，按照无特定病原级动物饲养标准喂养。小鼠喂以充足的啮齿类动物繁殖饲料，自由进食和饮水 ......