黄晓莹， 唐振宁， 刘奇伦

    (1.宁夏医科大学，银川 750004； 2.宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤外三科，银川 750004)

    乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，是全球女性第一大癌症死亡原因[1]。细胞焦亡是在细胞凋亡和坏死后发现的一种新的程序性、炎症性细胞死亡形式，它的特征是细胞肿胀，从细胞中吹出大气泡。细胞焦亡作为一种促炎型死亡，可抑制肿瘤的发生、发展。研究[2]表明，细胞焦亡与其相关信号通路中各种炎性介质的释放、肿瘤的发生及其耐药密切相关。

    Gasdermin E(GSDME)是Gasdermin 家族的一员，在细胞焦亡和继发性坏死的调控中发挥重要作用。焦亡相关的Caspase-3 在化疗药物、肿瘤坏死因子、病毒感染等激活下可特异性切割GSDME，从而导致细胞焦亡。此外，GSDME 被认为是一种抑癌剂，与结直肠癌、乳腺癌、肝癌和胃癌有关[3]。阿霉素(DOX)是临床常用的化疗药物，有关DOX 处理乳腺癌细胞发生细胞焦亡的研究较少，本课题采用慢病毒转染技术使乳腺癌MDA-MB-231 细胞中GSDME 高表达，探讨DOX处理过表达GSDME 乳腺癌细胞是否促进焦亡发生，以期为研究有抑制细胞焦亡作用的化疗药物提供实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    乳腺癌细胞株MDA-MB-231 购自中国科学院细胞库，一抗购自美国Abcam 公司，DOX 购自美国APExBIO 公司，慢病毒包装由自天津舍为斯科技有限公司完成，抗体购自美国Abcam 公司，细胞凋亡检测试剂盒、CCK-8 法试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司，乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒购自美国Promega 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 将复苏的乳腺癌细胞加L15培养基(10%胎牛血清、100 IU·mL-1青霉素和100 μg·mL-1链霉素)培养于T25 细胞培养瓶中，37 ℃、5%CO2的湿化培养箱中培养。细胞每2～3 d进行一次传代。

    1.2.2 GSDME 的基因克隆 用Trizol 法提取细胞中RNA ......