李彩霞， 李 元

    (1.宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系，银川 750004； 2.甘肃省人民医院中心实验室，兰州 730000)

    肾结石是泌尿外科的一种常见疾病，它在全球的发病率和复发率较高。它的形成涉及草酸钙晶体的成核、生长、聚集、滞留等过程[1]。草酸钙的主要成分为一水草酸钙(COM)和二水草酸钙(COD)，研究发现，肾脏中过量的草酸钙会引起肾小管上皮细胞的损伤[2]以及诱导肾小管细胞发生上皮间质转换(EMT)，加重肾结石患者的疾病进程[3]。EMT 发生过程中，上皮细胞转换为间质细胞，引起细胞中细胞外基质(ECM)的重塑，而肾脏中ECM 重塑与胶原含量的变化以及和基质金属蛋白酶(MMPs)及组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)的动态平衡[4]有关。

    整合素连接激酶(ILK)是一种丝氨酸-苏氨酸激酶[5]。ILK 的异常表达与肾细胞癌[6]、肾小管间质纤维化[7]、糖尿病肾小球病变和先天性肾病综合征有关。Huang 等[8]研究发现，去除小鼠肾皮质集合管主细胞中的ILK，导致肾脏严重炎症和间质纤维化，ILK 表达量的变化在肾小管上皮细胞病变中扮演重要的角色。根据以上研究草酸钙能够诱导EMT 的发生并引起ECM 重塑，而ILK和肾脏疾病有着密切的关联。目前尚未发现有关肾结石疾病与ILK 之间是否存在关系的报道，本实验通过将HK-2 细胞暴露于COM 中，初步探讨ILK 在COM 诱导HK-2 细胞EMT 中的作用，为相关研究提供理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 主要材料

    HK-2 细胞(中科院上海细胞库购买，产品编号：BNCC295668)；CCK-8 试剂盒和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)相关试剂购自碧云天生物技术有限公司；ILK、MMP-2、MMP-9、TIMP-1 和β-actin 引物由Invitrogen 公司合成；Western blot所用α-SMA(GTX100034)、COL1A1(GTX112731)、Fibronectin(GTX1000516)、Vimentin(GTX100619)和TIMP-1(GTX108254)均购自Gene Tex 公司；ILK(12955-1-AP)、MMP-2(10373-2-AP)、MMP-9(10375-2-AP)和β-Actin(23660-1-AP)均购自Proteintech 公司；E-cadherin(#3195)购自Cell Signaling Technology 公司 ......