孙亚群， 彭庆杰， 王强强， 苏亚珊，2， 陈科明，， 李广永， 吴 际， 何 瑞

    (1.宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室，银川 750004； 2.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004；3.宁夏医科大学总医院泌尿外科，银川 750004)

    肥胖症、2 型糖尿病等代谢紊乱性疾病是严重威胁人类健康的重要问题，越来越多的证据[1-4]表明，代谢紊乱与不孕症密切相关，影响着全世界约10%的育龄夫妇。由于下丘脑-垂体-卵巢轴的失调，肥胖女性比正常体质量的女性更容易发生排卵障碍[5-6]，引起内分泌紊乱及不孕。多囊卵巢综合征是典型代谢内分泌紊乱与生殖内分泌紊乱进而影响卵巢功能的疾病。卵巢的主要功能包括卵泡发育，卵母细胞的产生、成熟和释放，以及调节生殖和非生殖功能的雌性激素和肽激素的合成[7]。在糖尿病-肥胖综合征及多囊卵巢综合征中，进行性高血糖-高胰岛素血症与周期性卵巢卵泡募集模式的抑制、无排卵、无周期性、卵巢类固醇激素合成和释放抑制、血管减少和组织缺血、卵泡闭锁增强以及组织过早萎缩和退化有关[8-9]。糖脂代谢紊乱可以引起卵巢微环境改变，影响卵巢细胞功能，进而影响卵巢功能。已有研究[8-9]发现，肥胖和高血糖患者卵巢细胞退化可能与糖毒性和进行性细胞脂毒性作用的存在有关，但目前缺乏代谢紊乱相关的卵巢细胞模型，具体机制尚不清楚。本研究通过在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells，CHO 细胞)的培养液中加入葡萄糖及油酸，模拟肥胖2 型糖尿病患者高糖高脂的代谢紊乱微环境，建立CHO细胞代谢紊乱损伤模型，并初步探讨其机制，为代谢紊乱损伤卵巢功能的研究提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞

    CHO 细胞(公认的卵巢细胞系)购自BNCC公司。将CHO 细胞传代于含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM/F-12 培养基，置于含5% CO2、37 ℃恒温培养箱中培养。

    1.2 主要试剂

    DMEM/F-12 培养基(货号SH30023.01)购于HyClone 公司；彩色蛋白Marker、蛋白上样缓冲液、蛋白酶抑制剂、RIPA 裂解液购于上海雅酶生物医药科技有限公司；BCA 蛋白浓度测定试剂盒、苏木素-伊红染色液购于上海碧云天生物技术有限公司；CCK-8 试剂盒购于索莱宝生物科技有限公司；油酸(货号O1383)购于Sigma 公司；DMEM高糖培养基(货号SH30022.01)购于HyClone 公司；p-mTOR 一抗(货号2971)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)一抗(货号2983)、p-AMPK 一抗(货号2535)、AMPK 一抗(货号2532)、Caspase-3 一抗(货号9662)购于Cell Signaling Technology公司；PCNA 一抗(货号ab18197)购于Abcam 公司；β-actin 一抗(货号sc-47778)购于Senta Cruz Biotechnology 公司；异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate ......