王丽燕， 李艳宁， 王红霞， 蒋 丹， 张艳婷， 张爱君， 徐广贤，

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004； 2.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004； 3.广东医科大学医学技术学院，广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室，广东医科大学检验医学研究所，东莞 523808)

    人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)属于原癌基因，定位于染色体17q21，编码HER-2 受体[1]。20%～30%的原发性浸润性乳腺癌患者过表达HER-2 基因[1]，与疾病复发率增加和预后不良密切相关[2]。随着许多类型肿瘤基因组图谱的增加，发现HER-2 基因的过度表达不仅出现于乳腺癌，也出现在其他类型肿瘤中，如胃癌、结肠癌等[3-5]。曲妥珠单抗(trastuzumab)是第一个靶向HER-2 的单克隆抗体[6]，具有一定的疗效，但会引发患者心脏毒性，并且容易产生耐药性[7]。因此，寻求更为有效的抗体用于HER-2 基因过表达癌症的治疗显得尤为迫切。

    纳米抗体具有分子质量小(15 kDa)、亲和力高、免疫原性低、组织穿透力强、易与隐蔽抗原结合等特点，临床上既可用于肿瘤治疗，也可作为诊断工具[8-9]，具有很大发展空间。基于此，本研究在驼源天然噬菌体纳米抗体展示库中，以生物素化HER-2 抗原为靶点，筛选特异性抗HER-2纳米抗体，并与人IgG1 Fc 片段偶联，对重组纳米抗体进行表达与鉴定分析，以期为以HER-2为靶点的疾病检测、诊断与治疗药物研究提供理论参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    天然噬菌体纳米抗体展示库、大肠杆菌TG1以及辅助噬菌体KM13 均为本实验室保存；SKBR-3 细胞购自中科院细胞典藏库；HER-2 抗原及生物素化HER-2 抗原购自北京百普赛斯生物科技股份有限公司；链霉亲和素磁珠(InvitrogenTMDynabeadsTMM-280 Streptavidin)购自Thermo Fisher Scientific 公司；HRP 标记的羊抗人IgG(H+L)、FITC 标记的羊抗人IgG(H+L)购自Proteintech 公 司；Albumin Bovine、ELISA 包 被 液、ELISA 终止液、TMB 单组份显色液购自北京索莱宝科技有限公司；CCK-8 试剂盒购自日本同仁公司；氯化钠、葡萄糖均为国产分析纯；酵母提取物、胰蛋白胨购自OXOID 公司；脱脂奶粉购自BD公司；HRP 标记的小鼠抗M13 抗体购自北京义翘神州生物技术有限公司；异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalactoside ......