曹 鹏，王运帷，官 浩，陈 阳，任丽颖，姚 明

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004；2.宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科，银川 750004；3.空军军医大学第一附属医院全军烧伤中心烧伤与皮肤外科，西安 710032)

    烧伤或创伤是临床上常见的一种病症，重度烧伤或创伤会引起一系列皮肤和全身系统的病理生理变化。瘢痕组织是烧伤或创伤后创面修复的必然产物，据估计，有超过70%的人在烧伤或创伤后会形成增生性瘢痕[1-2]。增生性瘢痕在形成过程中常伴有瘙痒、疼痛、挛缩等症状，出现在关节活动部位的瘢痕甚至会影响关节的活动，给患者及家人带来沉重的心理和经济负担[2-4]。近年来，增生性瘢痕的治疗和预防方法取得了明显的进展，但对于增生性瘢痕的发病机制目前尚不明确。既往研究[1，5-6]表明，创面愈合和瘢痕形成与转化生长因子β1(TGFβ1)有关。TGFβ1/Smad 信号通路调节胶原合成，在瘢痕形成过程中起重要作用，调控TGFβ1/Smad 对抑制瘢痕增生十分重要。二甲双胍是临床上广泛应用的一种糖尿病经典治疗药物，具有抑制肝脏糖异生、增强骨骼肌葡萄糖摄取的作用。作为一种双胍类口服降糖药广泛应用于2 型糖尿病患者。研究[7-8]发现，二甲双胍还具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和减少许多器官纤维化的功能，可通过促进肌成纤维细胞的失活和凋亡而降低肝脏和肾脏纤维化的作用。目前关于二甲双胍用于增生性瘢痕的研究尚未见报道，本研究以原代培养的增生性瘢痕中成纤维细胞为研究对象，给予不同浓度的二甲双胍进行干预，检测各组细胞中CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA 和CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、α-SMA 及TGFβ1/Smad 信号通路的磷酸化水平，初步探讨二甲双胍通过TGFβ1/Smad 信号通路抑制瘢痕增生的机制，为增生性瘢痕的预防、治疗及药物筛选提供新的靶点和理论指导。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    收集2021—2022年在空军军医大学第一附属医院烧伤与皮肤外科接受治疗并手术的增生性瘢痕患者，标本经手术切除获得，所有患者均知情同意。本组共4 例，男性2 例，女性2 例，年龄18～35 岁。其中2 例位于上肢，2 例位于下肢。4 例患者均无其他系统性疾病，手术前均未接受任何药物注射、放疗或外科治疗，符合实验要求标准[9]。

    1.2 主要试剂

    1 mol·L-1二甲双胍购自西安灏洋生物技术有限公司；DMEM 培养基、胰蛋白酶、胎牛血清、青霉素和链霉素均购自美国Gibco 公司；兔抗人β-actin、TGFβ1、Smad3、p-Smad3、CollagenⅠ、CollagenⅢ和α-SMA 多克隆抗体购自Abcam 公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗购于北京博奥森生物技术有限公司；PMSF、RIPA裂解液、BCA 蛋白浓度测定试剂盒均购自江苏碧云天生物科技有限公司；PVDF 膜购自美国密理博公司；RIPA 裂解液均购自北京索莱宝生物科技有限公司；TRIzol Reagent 购自美国Invitrogen公司；反转录试剂盒、荧光染料试剂盒均购自日本Takara 公司；SDS-PAGE 凝胶试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；DU800 型分光光度计购自德国贝克曼库尔特商贸有限公司；Mini 型蛋白电泳系统、电转印系统均购自美国Bio-Rad 公司；M200 型全波段酶标仪购自瑞士Tecan 公司 ......