miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中的表达
细胞周期,1材料与方法,1材料来源,2主要试剂,3筛选miR-K1-5p的靶基因,4确定miR-K1-5p和靶基因的信号通路,分析通路上关键基因,5免疫组化(IHC)检测,6结果判断,7统计
张 静,彭靖淇(1.新疆医科大学附属中医医院病理科,乌鲁木齐 830000;2.新疆医科大学附属中医医院外科,乌鲁木齐 830000)
卡波西肉瘤主要是由卡波西肉瘤相关病毒(KSHV)感染内皮细胞引起的血管源性恶性肿瘤[1]。miRNAs 是一种非编码小分子RNA,通过结合靶基因的3'非翻译区(3'UTR)去降低或沉默靶基因的表达而发挥强大的调控作用。KSHV miRNA 也能通过复杂的机制诱导卡波西肉瘤的发生。课题组前期实验中通过对卡波西肉瘤miRNA 差异表达谱的筛选,证实卡波西肉瘤中miR-K1-5p表达明显上调[2],进一步的体外实验发现在卡波西肉瘤细胞株中miR-K1-5p 可以促进G1/S 期转换,但其中的机制并不清楚。因此,本文检测miR-K1-5p 相关的G1/S 期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中的表达,以期为进一步研究miR-K1-5p对卡波西肉瘤细胞周期的调控奠定理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料来源
收集新疆医科大学附属中医医院及市友谊医院存档的40 例卡波西肉瘤石蜡包埋块,以新疆医科大学附属中医医院40 例存档的血管瘤石蜡包埋块做对照(经医院伦理委员会批准实施,批件编号2019XE0133),由两名高年资病理医师独立阅片后纳入。卡波西肉瘤患者:男性35 例,女性5 例,年龄32~82 岁;血管瘤患者:男性24 例,女性16例,年龄1~80 岁。
1.2 主要试剂
免疫组化抗体均购自武汉博士德工程有限公司:细胞周期素依赖蛋白激酶抑制剂4(CDKN4)、细胞周期蛋白A(CCNA)、细胞周期蛋白D2(CCND2)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、周期素依赖性激酶4(CDK4)。
1.3 筛选miR-K1-5p 的靶基因
通过生物信息软件miRDB 和TargetScan Custom 筛选miR-K1-5p 的靶基因 ......
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