徐方晶，王 洁，范玉成，张 瑜，孙美琪，何 静，何 军

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004；2.宁夏医科大学总医院，银川 750004；3.宁夏医科大学附属石嘴山市第一人民医院病理科，石嘴山 753600)

    缺血性心脏病(ischemic heart disease，IHD)是目前世界范围内导致死亡的主要原因之一，给个人和社会带来了巨大的经济负担[1-2]。心肌缺血时，心肌细胞线粒体有氧呼吸减弱、三磷酸腺苷(ATP)合成减少，致使心肌细胞能量供应不足，无法维持正常的生理功能，最终导致心肌细胞凋亡或坏死。心脏是富含线粒体的器官，线粒体占心肌细胞体积的1/3，心脏收缩所需能量的90%以上由线粒体生成和提供[3]。因此，线粒体结构与功能的稳态对维持正常的心脏功能十分重要。

    线粒体泛素连接酶1(mitochondrial ubiquitin ligase 1，Mul1)是一种线粒体外膜锚定蛋白，也被称为线粒体锚定蛋白连接酶(mitochondrial-anchored protein ligase，MAPL)或生长抑制及死亡E3连接酶(growth inhibition and death E3 ligase，GIDE)，在心、脑、肝、肾、脾、骨骼肌、小肠、肺及外周血白细胞等组织与细胞中表达。Mul1 分子的N 端和C 端均含有跨膜结构域，其位于C 端的环指结构域具备E3 连接酶活性，发挥蛋白质泛素化或类泛素化(small ubiquitin-like modifier，SUMO)修饰功能[4-6]，通过调控核因子κB(nuclear factor-KappaB，NF-κB)、c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)、p53 蛋白和蛋白激酶B(protein kinase B，PKB/Akt)等信号分子[7-10]，直接或间接参与细胞生长、线粒体动力学及炎症与免疫反应。本课题组的前期研究[11]发现，Mul1 在急性缺血心肌组织中呈特异性高表达，由此推测Mul1 参与调控缺氧心肌的病理生理变化。本研究利用缺氧大鼠心肌细胞模型，通过对Mul1 过表达和沉默干预，观察Mul1 对大鼠缺氧心肌细胞存活率和结构的影响，探讨Mul1 对缺氧心肌细胞损伤的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料、试剂与仪器

    大鼠心肌细胞H9C2(上海中科院细胞库)；Mul1 过表达慢病毒载体LV-Mul1 和Mul1 敲减慢病毒载体LV-Mul1-RNAi 及其相关空载体(上海吉凯基因公司)；HitransG P 感染增强液(上海吉凯基因公司)；RNA 提取试剂盒(天根生化公司)；HiScript ⅡQ RT SuperMix for qPCR(诺唯赞公司)；QuantiNovaTMGreen PCR Kit(凯杰企业管理有限公司)；无糖DMEM 培养基和胎牛血清(Gibco 公司)；高糖DMEM 培养基和青链霉素双抗(BI 公司)；全蛋白提取试剂盒、BCA 蛋白含量检测试剂盒和SDS-PAGE 快速凝胶配制试剂盒(凯基生物公司)；Mul1 抗体(兔多克隆抗体 ......