马慧颖，李 玲，2，3，郭晓英，德小明，2，3，李丽萍，2，3，郝 羽，闫凤梅

    (1.宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 750004；2.宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室，银川 750004；3.生育力保持教育部重点实验室，银川 750004)

    邻苯二甲酸酯类化合物(phthalic acid esters，PAEs)作为增塑剂，常被用在儿童玩具、食品外包装和医疗器械等产品的生产过程中[1]。在对中国23 个城市水源中邻苯二甲酸酯类物质浓度进行检测时发现，邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate，DEHP]的检出率高达87.9%[2]。在生物体内，DEHP 经过一系列酶促反应形成活性代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-2-ethylhexyl phthalate，MEHP)，MEHP具有生殖和发育毒性等[3]，其在生物组织中蓄积时间长达6 个月，因此MEHP 的毒性评估不容忽视[4]。在哺乳动物细胞中，自噬是一种非常保守的机制，自噬可介导受损的细胞成分向溶酶体传递以维持体内平衡[5]。本课题组前期研究发现，MEHP染毒能够诱导胞质内产生自噬体[6]。N6-甲基腺嘌呤(m6A)是真核细胞中最丰富的RNA 甲基化形式，研究[7]表明，m6A 甲基化在精子发生和胚胎发育中起到了重要的调控作用，m6A 去甲基化酶可影响小鼠睾丸精子的生成[8]，m6A 甲基化酶缺失导致精子发生相关基因的改变，从而使精原细胞分化等功能无法正常进行[9]。本实验通过加入甲基化抑制剂3-脱氮腺苷(3-deoxyioden osine，DAA)观察m6A 甲基化在MEHP 致小鼠睾丸间质细胞自噬中的作用，为进一步研究m6A 甲基化在PAEs中致雄性生殖毒性的作用提供理论依据和研究基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株、主要仪器与试剂

    1.1.1 细胞株 小鼠睾丸间质细胞株(TM-3)(中国科学院细胞库)。

    1.1.2 主要仪器 CO2培养箱、发光成像系统、超微量紫外分光光度计(美国Thermo Fisher Scientific 公司)，净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，康宁细胞计数仪(上海康宁管理有限公司)，细胞成像系统倒置生物显微镜(深圳爱可机械有限公司)，高速冷冻离心机(上海力申科学仪器有限公司)，多功能酶标仪(美国珀金埃尔默股份有限公司)。

    1.1.3 试剂 MEHP、DMSO溶剂(美国Sigma 公司)，DAA(美国Cayman Chemical 公司) ......