张浩鹏，张丽君，纪 琴，侯少华，常 鑫，李 海

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004；2.济宁医学院附属医院兖州院区呼吸内科，济宁 272000；3.宁夏医科大学总医院结直肠外科，银川 750004)

    细胞运动和侵袭以及肿瘤发生和转移是癌症恶性潜能的特征，转移是导致癌症死亡的主要原因[1]，大约15%的结直肠癌患者发生转移后，其平均生存时间不到3 年[2]。肿瘤微环境可以促进肿瘤的进展[3]，来自原发性肿瘤的机械应力可诱导非转化的相邻细胞群中的致瘤信号传导，进而促进细胞生长和肿瘤增加。同时，生物力学可以通过在转化细胞中诱导间充质样开关来驱动肿瘤攻击，使它们获得肿瘤起始特性[4]。Piezo2 作为机械力活化的离子通道，将机械应力-细胞内信号-癌症紧密地联系在一起，参与结直肠癌的发生发展。本研究主要通过对人结肠癌细胞系SW620和HCT116 细胞的Piezo2 表达进行干预，检测两种细胞在干预前后增殖、迁移、侵袭能力的变化。

    1 资料与方法

    1.1 细胞与主要试剂

    NCM460(人正常结肠上皮细胞系)、SW480(原发结肠腺癌细胞系)、HCT116(原位肠癌细胞系)和SW620(结肠癌淋巴结转移细胞系)均购于美国ATCC 细胞库。RPMI-1640 培养基(美国GIBCO 公司)，McCoy’s 5A 培养基(美国GIBCO 公司)，Leibovitz’s L-15 培养基(美国GIBCO 公司)，蛋白含量检测试剂盒、凯基全蛋白提取试剂盒、彩色蛋白Maker(江苏凯基生物技术有限公司)，胎牛血清(BI 公司)，PVDF 膜(美国密理博公司)，Transwell 小室(CORNING 公司)，ki67 抗体(Abcam 公司)，重组慢病毒LV-Piezo2-RNAi、阴性对照病毒CON313、HiTransGP 病毒感染试剂(上海吉凯基因医学科技有限公司)，Trizol 试剂(美国赛默飞公司)，反转录-荧光定量试剂盒(天根生化科技北京有限公司)，Piezo2 及GAPDH 引物由上海生物工程有限公司设计合成，GAPDH 抗体(北京博奥森生物技术有限公司)，Piezo2 抗体(Abcam 公司)、HRP Goat Anti-Rabbit IgG(ABclonal 公司)、Western blot 高敏型ECL 化学发光检测试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)。

    1.2 实验分组

    阴性对照组(LV-NC)为阴性慢病毒转染的稳定细胞系 ......