马世玲，黄李雅

    (1.宁夏医科大学，银川 750004；2.宁夏医科大学总医院，银川 750004)

    胰腺癌是一种致命的恶性肿瘤，主要起源于胰腺导管上皮，是导致癌症相关死亡的原因之一[1]。胰腺癌起病隐匿，约80%的患者在明确诊断时已经失去手术机会。晚期患者行化疗、放射治疗或其他综合治疗效果有限，即使近年来兴起的肿瘤免疫疗法，也因肿瘤细胞表面缺乏免疫原性及其独特的肿瘤微环境存在很大的挑战和窘境[2]。

    成纤维细胞生长因子(fibroblase growth factors，FGFs)由23 个成员组成，人类FGF 信号转导涉及发育、肿瘤、代谢和神经疾病[3]。成纤维细胞生长因子21(FGF21)被认为是一种重要的内分泌代谢调节因子，主要在肝脏、胰腺和脂肪中表达，此外，在肾脏中也有所表达[4]。研究[5]表明，FGF21 在肿瘤发生发展中也具有潜在调节作用。目前，FGF21 在胰腺癌的发生和发展中的具体作用机制尚不清楚。为探究FGF21 对胰腺癌细胞表型的影响，本研究将FGF21 过表达技术应用于胰腺癌细胞PANC-1，观察FGF21 对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响，以阐释FGF21 抑制胰腺癌细胞发展机制，以期为胰腺癌寻找新的有效靶向治疗位点提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株及重组慢病毒载体 人胰腺癌细胞株PANC-1 购自中国科学院(上海)细胞库。在宁夏医科大学总医院干细胞实验室培养。含过表达FGF21 基因序列的重组慢病毒载体HBLVh-FGF21-3xflag-ZsGreen-PURO 及慢病毒空载体HBLV-ZsGreen-PURO 购自汉恒生物科技(上海)有限公司。

    1.1.2 主要试剂 DMEM 高糖培养液和胎牛血清购自美国Gibco 公司；兔抗人FGF21 单克隆抗体、兔抗人Cleaved-caspase3 单克隆抗体、兔抗人Caspase3 单克隆抗体、兔抗人Caspase9 单克隆抗体均购自美国Abcam 公司；GAPDH、Tublin 购自美国Proteintech 公司；ECL 试剂盒购自江苏凯基生物技术有限公司；引物购自上海生工生物工程有限公司；RNA 反转录试剂盒、荧光定量PCR 试剂盒和CCK-8 试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司；流式凋亡试剂盒购自上海伟进生物科技有限公司；吉西他滨购自上海源叶生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及重组慢病毒感染 人胰腺癌细胞株PANC-1 用含10%胎牛血清的DMEM 培养液 ......