任贺贺， 吴梦静， 常 青

    (1.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004； 2.宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室，宁夏回族自治区生殖与遗传重点实验室，银川 750004)

    卵巢是女性重要的生殖与内分泌器官。在40 岁以下的女性中，1.0%～1.5%的女性因卵巢早衰(premature ovarian failure，POF)而面临提前绝经[1]。目前临床上对于卵巢早衰的治疗方法主要有激素疗法[2]。对于青春期前患者也采用卵巢组织冻存移植技术[3]。然而，激素疗法不能恢复POF患者的生育能力，同时具有潜在致癌风险，而卵巢组织冻存移植技术又有癌细胞回移至体内的风险[4]。因此，迫切需要一种安全有效的方法，恢复POF 患者的生育力和内分泌功能。组织工程卵巢重建有望解决这一问题[5]。近年来，细胞外基质(extracellular matrix，ECM)支架作为卵巢再生的方法在生殖医学领域引起了广泛的关注[6-10]。ECM是一种存在于细胞外的三维结构，由周围细胞分泌，主要由胶原蛋白、弹性蛋白、纤维连接蛋白和层粘连蛋白等组成[11-12]。细胞外基质支架一般由组织或器官脱细胞制作[13]。脱细胞化是通过物理、化学或组合方法从组织中去除细胞，只留下具有三维结构的细胞外基质支架[14-16]。已有报道[17]称ECM 支架可以与卵泡体细胞进行细胞信号传导，促进卵泡生长和分化，以及卵母细胞减数分裂能力。目前用于卵泡培养的ECM 支架多来源于异体的卵巢，这就存在免疫排斥的可能[2]。为了克服这个缺点，本研究选用自体腋下淋巴结作为ECM 支架的来源进行卵巢再生和观察支架的结构及毒性，并植入腔前卵巢观察卵泡的生长和功能。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    C57BL/6J 小鼠购自宁夏医科大学实验动物中心，在SPF 实验室饲养。本实验通过了宁夏回族自治区动物保护委员会的批准[SCXK(宁)2014-050]。

    1.2 小鼠淋巴结的获取与脱细胞处理

    收集8～10 周龄C57BL/6J 小鼠的淋巴结。分离剔除结缔组织和脂肪，用磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffer saline，PBS)洗涤淋巴结，然后在-80 ℃冷冻以进行后续实验。

    脱细胞过程如下所示，分别在-80 ℃和37 ℃进行3 次冷冻和解冻。将淋巴结分别用0.5%十二烷基磺酸钠(SDS，美国Sigma 公司)处理10 h和1% Triton X-100(美国Sigma 公司)处理24 h ......