杨治伦， 陈小江， 陈飞飞， 原茜倩， 马全瑞， 秦 毅

    (宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系，银川 750004)

    小胶质细胞作为中枢神经系统(central nervous system，CNS)中固有的免疫效应细胞，其在许多神经疾病中可介导产生神经炎症[1]，造成二次损伤[2]，这一过程往往伴随着细胞焦亡的发生[3]，其通过介导胞膜穿孔来加剧神经炎性反应[4-5]。因此，寻找可以有效抑制细胞焦亡的药物具有重要的临床意义。研究[6]表明，黄芪提取物黄芪甲苷(astragaloside IV，AS-IV)可以有效抑制缺血性脑损伤大鼠模型中与焦亡发生相关的NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1，Caspase-1)、胞膜穿孔蛋白D(gasdermin D，GSDMD)、白细胞介素(interleukin，IL)-1β 产生。但是，AS-IV 对于小胶质细胞是否有相似的抑制作用尚未可知。为了进一步探究其是否存在抑制作用，本研究以AS-IV 干预小胶质细胞系(BV2)，探讨不同浓度AS-IV 对凝血酶激活的小胶质细胞表达焦亡相关因子的影响，并对相关机制进行分析，以期为AS-IV 应用于临床治疗神经炎性反应提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    小鼠小胶质细胞BV2 细胞系购于广州赛库生物技术有限公司；AS-IV 标准品(20 mg，纯度≥98%)购于北京索莱宝科技有限公司；凝血酶(T4648-1KU)购于美国Sigma 公司；ECL 化学发光底物试剂盒购于江苏凯基生物技术有限公司；凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated specklike protein containing CARD，ASC)、Caspase-1、GSDMD 多克隆抗体、Cy3 荧光Rabbit 二抗、HRP标记Mouse 二抗、HRP 标记Rabbit 二抗均购于武汉爱博泰克生物科技有限公司；NLRP3 多克隆抗体购于北京博奥森生物技术有限公司；β-actin单克隆抗体购于英国Abcam 公司；北美胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购于美国Gibco 公司；小鼠IL-1β 及IL-18 ELISA 试剂盒均购于上海酶联生物科技有限公司 ......