翁晓梦， 李 玲， 宋贝贝， 黄金瑞， 德小明， 李丽萍，张亚娟， 张鹏举

    (1.宁夏医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学系，银川 750004； 2.宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室，银川 750004)

    邻苯二甲酸酯类(phthalic acid esters，PAEs)，又称为塑化剂，因其能够软化塑料、增加弹性，被广泛应用于合成橡胶、黏合剂、涂料等生产用品。以邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)为代表的塑化剂类物质在聚合物分子中以范德华力结合，导致其在高温等条件下易解离逸散，并主要通过口腔、皮肤、呼吸道和静脉途径进入人体[1]。在多器官系统中，DEHP 的毒性是由邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)介导产生的[2]。邻苯二甲酸酯及其代谢物可在男性精液中检测到，其中DEHP 和邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate，DBP)及其代谢产物MEHP、邻苯二甲酸单丁酯(MBP)是备孕男性精浆中主要的邻苯二甲酸酯类型，精液中邻苯二甲酸酯代谢物浓度对精液质量有不利影响[3]。目前，已有研究[4-5]从表观遗传学的角度来探讨PAEs 类物质的生殖毒性机制，在MEHP 致小鼠睾丸间质细胞(TM-3)雄性生殖损伤方面，对DNA 甲基化水平的研究还较少。本研究拟以TM-3 为受试细胞，检测MEHP 染毒对TM-3 细胞DNMT1、DNMT3B、转录因子FOXO1、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期抑制因子P27 mRNA 表达改变的影响，探讨MEHP对TM-3 细胞DNA 甲基化水平和周期进程的影响，以期为进一步阐明DNA 甲基化水平在MEHP致TM-3 细胞雄性生殖损伤中的作用提供研究思路和方向。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株来源、主要仪器和试剂

    TM-3 细胞(美国ATCC 细胞研究中心)。HF90 CO2培养箱(上海力申科学仪器有限公司)，I510全波长酶标仪(赛默飞世尔公司)，BioRad 荧光实时定量PCR 仪[伯乐生命医学产品(上海)有限公司]，柱形核酸纯化产品、PrimeScriptTMRT Master Mix 反转录试剂盒、TB GreenPremix Ex TaqTMⅡ实时荧光定量试剂盒[宝生物(大连)工程有限公司]、目的基因及内参基因引物[生工生物工程(上海)股份有限公司]、MEHP 标准品(纯度为97%，美国Sigma 公司)，DMEM 培养基、胎牛血清(美国Gibco 公司)，DNMT1 抗体(美国Cell Signaling Technology 公司) ......