陶宏宇， 朱 珊， 孙 楠， 张芙蓉， 王晨雨， 王 文

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004； 2.宁夏医科大学总医院超声科，银川 750004)

    RNA 干扰技术(RNA interference，RNAi)可通过双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)的定向干预来实现对靶点基因的沉默作用，目前被广泛应用于肿瘤及多种疾病的基础研究中[1-2]。由高分子材料合成制备的新型纳米粒作为一种非病毒核酸递送载体，可实现对dsRNA 的高效包载与体内稳定运输，相较传统的病毒载体有着较高的生物安全性及较低的制备成本，具有广阔的研究与应用前景[3-4]。本实验设计并制备了由透明质酸(hyaluronic acid，HA)修饰的新型纳米粒核酸递送载体(HDP@siRNA NPs)，通过检测其体内外生物安全性以及在超声-微泡(ultrasoundmicrobubble，US-MB)干预所产生的一系列生物效应介导下的体外细胞转染靶向性，探索该纳米粒作为新型核酸递送载体的应用潜力。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂及仪器

    聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-COOH，济南岱罡生物工程有限公司)，(2，3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐(DOTAP，上海艾伟拓医药科技有限公司)，HA(镇江东元生物科技有限公司)，NC-siRNA、Cy3-siRNA(广州市锐博生物科技有限公司)，聚乙烯醇(PVA，美国Sigma-Aldrich公司)，磷酸盐缓冲液(PBS，美国HyClone 公司)，焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate，DEPC)处理水(美国ThermoFisher 公司)，GelRed 核酸染料(美国Thermo Fisher 公司)，声诺维超声微泡(SonoVue，意大利Bracco 公司)，超声纳米材料粉碎仪(上海ZOLLO 公司)，Malvern 激光粒度仪(英国Malvern公司)，透射电镜(TEM，日本奥林巴斯株式会社)，NanoDrop 2000 分光光度计(美国Thermo Fisher公司)，低强度聚焦超声仪(LIFU，重庆融海超声医学工程研究中心有限公司)，多功能酶标仪(美国BioTek 仪器有限公司)等。

    1.2 实验细胞与动物

    4T1 肿瘤细胞购于中国科学院上海细胞库，SPF 级BALB/c 小鼠(雌性，4 周龄，体质量16～18 g，)购于宁夏医科大学实验动物中心。

    1.3 HDP@siRNS NPs 的制备 ......