徐海瑾，徐 彧，孔 斌，李 雄，李建宁，李 卉，曹婷婷，宋 辉

    (1.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004；2.宁夏医科大学内分泌学研究所，银川 750004；3.宁夏回族自治区人民医院胸外科，宁夏医科大学第三临床医学院，银川 750004)

    1 型糖尿病(type 1 diabetes mellitus，T1DM)和2 型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)的发病机制不同，但患者都会出现胰岛功能衰竭[1-2]。胰岛移植已被证明能够修复糖尿病患者的胰岛功能，但由于异体移植免疫排斥反应和胰岛供体资源的不足而不能满足患者的需求[3]。BMSCs 具有广泛的增殖和分化潜能，在体外能诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)，解决了供体胰岛短缺的问题，为细胞替代治疗提供了新的途径[4]。叉头状转录因子O1(forkhead box protein O1，FoxO1)在进化上高度保守，在哺乳动物中由4 个主要成员组成，包括FoxO1、FoxO3、FoxO4 和FoxO6[5]。FoxO1在肝脏和胰腺等胰岛素反应组织中高度表达，并与代谢调节密切相关[6]。FoxO1 基因敲除增加小鼠胰腺前体细胞来源的β 细胞数量并促进小鼠肠道内分泌前体细胞生成IPCs[7-8]。FoxO1 促进了人诱导性多能干细胞来源的肠道器官样培养物向功能性IPCs 的分化[9]，并上调了体外培养的人胎儿胰腺前体细胞生成的IPCs 中β 细胞标志物的表达[10-11]。FoxO1 在小鼠胰腺前体细胞中的过表达会导致体内胰腺发育不良[12]。此外，FoxO1 是成年胰岛β 细胞中胰腺十二指肠同源盒因子1(pancreatic and duodenal homeobox factor1，PDX1) 的负调控因子[13]，PDX1 在胚胎期胰岛β 细胞的生成和成熟过程中起着关键的调节作用[14]。因此，推测FoxO1 可能是BMSCs 分化为功能性IPCs 过程中的负性调控因子。本研究通过构建干扰FoxO1 基因的shRNA 慢病毒载体，建立干扰FoxO1 的大鼠BMSCs 稳转株，为后续研究FoxO1 在BMSCs 诱导分化为IPCs 过程中的作用及潜在机制奠定基础，进一步为干细胞治疗糖尿病的研究提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    SPF 级4 周龄雄性SD 大鼠10 只，体质量100～150 g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，并且按照宁夏医科大学实验动物伦理规定进行操作；大肠埃希菌Stbl3 菌株购自北京全式金生物技术有限公司 ......