马 星， 桂 娜， 马 婷， 王秀玉， 莫廷润， 张鸣号

    (1.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004； 2.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室，银川 750004； 3.宁夏血管损伤与修复研究重点实验室，银川 750004； 4.宁夏贺兰县人民医院，贺兰 750200)

    同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是引起动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)的独立危险因素[1]。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的增殖和迁移在Hcy 致As 发病过程中发挥着重要作用[2]，但Hcy 致VSMC 增殖迁移的发生机制尚不十分清楚。微小RNA(microRNAs，miRNAs)可以通过影响miRNA 降解或翻译，调控蛋白质的表达，在基因转录后调节中起着重要作用[3]。近年来的研究发现，miRNAs 参与调控As发生、发展的病理生理过程[4]。在Hcy 致VSMC 增殖迁移过程中是否受miRNAs 的调控有待进一步研究。本研究旨在探讨Hcy 致VSMC 增殖迁移过程中miRNAs 的差异表达，并分析预测其下游靶基因，以期为明确Hcy 致VSMC 增殖迁移的发病机制提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    人源VSMC 株(苏州北纳创联生物技术有限公司)，Hcy(美国Sigma 公司)，CCK-8 试剂盒(美国GlpBio 公司)。microRNA 快速提取试剂盒(北京艾德莱生物科技有限公司)，small RNA-seq 文库构建试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)，NovaSeq 6000 S4 测序试剂盒(美国Illumina公司)，总RNA 提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司]，逆转录试剂盒(美国Thermo Fisher Scientific 公司)。

    1.2 细胞培养

    用含10%胎牛血清的DMEM 高糖培养基培养VSMC，使用第3～7 代细胞。当VSMC 的融合度达到80%后，将VSMC 分为Control 组和100 μmol·L-1Hcy 组[5-6]。100 μmol·L-1Hcy 刺激VSMC 48 h，采用CCK-8 实验检测VSMC 增殖；采用细胞划痕实验检测VSMC 迁移。

    1.3 细胞增殖活力测定

    VSMC 以100 μL/孔，1×103～1×104个细胞的密度接种于96 孔板24 h ......