闫凤梅， 李 玲， 郝 羽， 黄 静， 撒开清， 王 硕

    (1.宁夏医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学系，银川 750004； 2.宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室，银川 750004)

    邻苯二甲酸酯类化合物(phthalic acid esters，PAEs)具有良好的可塑性和延展性，广泛用于塑料加工等行业[1]。PAEs 极易通过挥发、溶解和迁移等方式进入环境，最终经皮肤、呼吸道和消化道进入人体并对人体造成损害[2]。PAEs 的种类有很多，包括邻苯二甲酸二异壬酯(DINP)、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)、邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate，DBP)等[3]。有研究[4]表明，DBP 可以破坏鳃的能量代谢和形态，诱导肝毒性。DBP 通过激活NOD2/RIP2/NF-κB 信号通路，引起草鱼肝细胞凋亡和炎性因子水平的升高[5]。当DBP 被人体吸收后，能水解成邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate，MBP)，MBP 具有多种毒性，对动物生殖和发育有一定的影响[6]。有研究[7]表明，MBP 对雄性青春期大鼠内分泌器官有一定的毒性作用。MBP 也可以通过TNF/IL6/STAT3 信号通路诱导小鼠睾丸间质细胞株(TM-3)细胞铁死亡[8]。细胞焦亡是一种细胞程序性死亡方式，其发生通常与各种细胞死亡有关，如细胞凋亡和坏死。有研究[9-11]显示，Caspase-3/GSDME 通路可引起细胞焦亡，还可改变凋亡和焦亡之间的平衡[12]。本课题组前期研究结果表明，MBP 作用于睾丸间质细胞后会引起细胞凋亡[13]，一定剂量的MBP 可提高TM-3 细胞自噬水平[14]。因此，本研究以睾丸间质细胞为模型，以Caspase-3 介导的细胞焦亡为切入点，探讨MBP是否通过Caspase-3/GSDME 通路诱导睾丸间质细胞焦亡，为进一步研究MBP 致雄性生殖毒性的作用提供理论依据和研究基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株、主要仪器与试剂

    1.1.1 细胞株 小鼠睾丸间质细胞株(TM-3 细胞，美国ATCC 细胞研究中心)。

    1.1.2 主要仪器 CO2培养箱、发光成像系统、净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，细胞计数仪[康宁(上海)管理有限公司]，细胞成像系统倒置生物显微镜[爱可机械(深圳)有限公司]，高速冷冻离心机(上海力申科学仪器有限公司) ......