郭宇琪， 王亚丽， 张智源， 高玉婧

    (1.宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室，银川 750004； 2.宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系，银川 750004)

    转录因子增强子结合蛋白-2α(transcription factor activating enhancer binding protein 2 alpha，TFAP2A) 是转录因子AP-2 家族的成员之一。AP-2 家族由AP-2α、AP-2β、AP-2γ、AP-2δ 和AP-2ε 组成，通过与靶基因的启动子区域结合，调控参与细胞周期、细胞增殖、凋亡的众多基因的转录，在哺乳动物发育过程中起到重要作用。TFAP2A 基因缺失可导致鳃裂眼面综合征(branchio-oculo-facial syndrome，BOFS)。目前已发现该基因编码不同亚型的三种转录变体。TFAP2A与多种肿瘤的发生和发展密切相关。研究[1]发现，miR-876-5p 通过靶向TFAP2A 抑制乳腺癌发展；锌指蛋白ZNF471 通过转录抑制下游靶点TFAP2A 和PLS3 抑制胃癌发生[2]；TFAP2A 通过反式激活PSG9 来增强TGF-β 信号传导，从而促进肺腺癌转移[3]；TFAP2A 通过与PDL1 形成的正反馈通路促进宫颈癌的发生[4]。为深入研究TFAP2A 在肿瘤发生发展中的作用和机制，本研究构建了TFAP2A 的真核表达载体并对其表达效率进行了检测，为后续研究奠定了实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株、质粒和细胞 大肠杆菌DH5α 感受态为本实验室制备。CV702 质粒购自上海吉凯基因化学技术有限公司。MDA-MB-231 细胞为本实验室保存。

    1.1.2 主要试剂 限制性内切酶BamH I 和HindIII 购自英国New England Biolabs 公司；RPMI 1640 培养基购自美国Biological Industries 公司；Lipofectanmine 2000 购自美国Thermo Fisher Scientific 公司；ClonExpressTMⅡOne Step Cloning Kit 购自Vazyme 公司；GAPDH 抗体购自美国proteintech 公司；Flag 抗体购自美国Cell Signaling Technology 公司；TFAP2A 抗体购自美国abcam 公司 ......