蔡龙，张风卫，王珊珊，周红娟，骆思媛，商学钗

    (杭州市红十字会医院 中心实验室，浙江 杭州 310003)

    脐带血来源的调节性T细胞对SLE病人淋巴细胞的作用初探

    蔡龙，张风卫，王珊珊，周红娟，骆思媛，商学钗

    (杭州市红十字会医院 中心实验室，浙江 杭州 310003)

    目的通过分析脐带血调节性T细胞(CD4+CD25+细胞)的基本特性以及对系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)患者淋巴细胞的抑制功能，为治疗SLE等疾病提供新的思路。方法收集脐带血3例、SLE患者外周血6例和健康人外周血3例，肝素抗凝；检测CD4+CD25+及Foxp3+细胞比例；磁珠分选法分离各样本中CD4+CD25+细胞和CD4+CD25-细胞，分析各亚群细胞的纯度并进行体外扩增试验及体外抑制功能试验。结果脐带血中CD4+CD25+细胞和CD4+Foxp3+细胞比例最高，SLE患者外周血中最少；脐带血中CD4+CD25+细胞体外扩增能力比健康成人和SLE患者的CD4+CD25+细胞强。扩增后的脐带血CD4+CD25+细胞的体外抑制功能较扩增前及其它两者扩增后均增强，差异有统计学意义(P1 资料与方法

    1.1 实验试剂与设备 CD4CD25细胞磁珠分离试剂盒、T细胞刺激试剂盒(Anti-CD3/CD28 mAb-coated dynabeads)(Miltenyi biotec公司)；CD4CD25检测试剂盒(CD4-FITC、CD25-Cy5)、Foxp3-PE(eBioScience公司)；Foxp3 mAb(BD Pharmingen公司)；细胞培养板、细胞培养瓶(Corning公司)；流式细胞仪(Beckman coulter，型号为EPICS-XL。)；二氧化碳培养箱(Thermo)；离心机(Eppendorf)；倒置显微镜(Olympus公司)；MiniMACS免疫磁珠分选仪(MiltenyiBiotech公司)。

    1.2 样本来源 经医院医学伦理委员会批准后进行样本收集。脐带血来源于在我院分娩的产妇。在征得产妇本人同意，待胎儿分娩后，从离体后的胎盘中抽取脐带血约100mL左右；共6例。选择未经治疗的本院SLE初诊患者6例，抽取外周血40mL；选择同期健康体检者6人，抽取外周血60mL；收集样本前均征得本人同意并签订知情同意书。

    1.3 CD4CD25细胞比例及Foxp3+细胞比例检测 抽取离体后脐带血、SLE患者外周血和健康人外周血，肝素抗凝 ......