翟昌林，钱 钢，胡惠林，唐关敏

    (嘉兴市第一医院 心内科，浙江 嘉兴 314000)

    心肌缺血后血流恢复对缺血区的供应称为缺血再灌注，但在再灌注过程中同样会造成心肌细胞的凋亡，这一过程称为I/R，即缺血再灌注损伤(I/R)[1]。缺血再灌注损伤通常发生在一些临床上对急性冠脉综合征的一些干预过程中，例如溶栓，支架介入或者心脏移植手术。相关研究显示AKT通路调节了哺乳动物细胞的大部分应答，在I/R过程中AKT通路的激活可抑制细胞的凋亡并激活存活路径[2]。依布硒啉是一种具有很好的过氧化物酶作用的有机硒化合物，研究报道依布硒啉可通过抗氧化作用，抑制氧自由基的生成积累，减少脂质过氧化作用来抑制心肌细胞凋亡[3]。然而在I/R过程中依布硒啉是否通过AKT/eNOS通路发挥再灌注缺血损伤保护作用及其具体机制仍未知，本文以此为出发点进行相关研究。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 鼠龄8周雄性SD大鼠30只，体质量240～260g，充足食水，在21±2℃的环境中饲养，由浙江大学实验动物中心提供；TUNEL检测试剂盒、NO检测试剂盒购自Roche，TNF-α、Caspase-3、磷酸化AKT/eNOS的兔多克隆抗体均购自Abcam，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体均购自Roche，依布硒啉购自美国cayman生物公司。

    1.2 大鼠心肌再灌注模型建立 参照Zeng XC等[4]文献中方法：3%的戊巴比妥钠以30mg/kg进行腹腔注射，麻醉后固定于手术台面，行气管切开，接呼吸机维持呼吸，右颈动脉插管进入左心室采集心功能相关参数，于胸骨左缘心尖搏动最强处行纵形切口，钝性分离皮下组织，剪开心包暴露心脏，以左冠状静脉为参照，于肺动脉圆锥右侧，镊子提拨起左心耳，左心耳下缘1.5mm处用线穿过，连同硅胶管一起结扎，结扎冠状动脉至无血流通过1h，松开冠状动脉结扎，再持续灌注2h，即完成心肌缺血再灌注损伤模型的建立。结扎后心电图II导联ST段呈弓背向上抬高大于0.1mv，QRS波变宽振幅扩大，心肌颜色变灰白为阻断成功标志，造模成功后即刻采集心功能各项参数后再通过颈动脉采血提取血液样本1mL，术后即刻颈椎脱臼法处死各组大鼠并摘除心脏，术中死亡大鼠不记入实验。

    1.3 动物分组 30只SD大鼠随机分为3组，每组10只。假手术组：手术过程中穿线但不予结扎，术前1 min腹腔推注生理盐水2mL；缺血再灌注组：结扎1 h ......