何卓晶，陶 薇，傅 婷，周寒鹏，洪 艳

    (杭州医学院 生物工程研究所，浙江 杭州 310013)

    2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2， HSV-2)感染可引起皮肤水泡、溃疡性病变及神经系统和泌尿系统的并发症，易传播给易感的性伴侣、胎儿和新生儿[1]，可增加感染人类免疫缺陷病毒的危险[2-3]。HSV-2感染导致的生殖器疱疹是引起生殖器区域溃疡的原因之一，可引起相关的公共健康问题[4-5]。HSV-2初次感染期间，病毒即在骶神经节中终身潜伏下来，并能再次激活导致复发。目前，生殖器疱疹的标准治疗和预防药物为鸟苷类似物，如阿昔洛韦，伐昔洛韦，喷昔洛韦和泛昔洛韦。鸟苷类似物药物能通过干扰HSV的DNA聚合酶而抑制病毒复制，但该类药物需每日给药以维持其抑制病毒复制的作用，且很多HSV毒株对该类抗病毒药物产生了抗性[6]。疫苗是控制生殖器疱疹的另一有效策略，HSV-2病毒衣壳上的糖蛋白D(glycoprotein D， gD)具有较高的免疫原性，近年来逐渐成为单纯疱疹病毒亚单位疫苗的研究热点。本研究构建gD糖蛋白基因表达质粒pcDNA3Kan-gD，并观察其在Hela细胞中的表达情况，旨在为单纯疱疹病毒亚单位疫苗的研究提供基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料与试剂 质粒pcDNA3Kan为本实验室构建的含卡那霉素抗性的真核表达质粒载体，pcDNA3Kan-gD为本实验室保存的含有HSV-2糖蛋白gD基因的质粒。Hela细胞、BALB/c小鼠抗HSV-2血清均为本单位生物工程所制备及保存。RNA抽提试剂盒购自杭州诺扬生物技术有限公司，限制性内切酶、T4DNA连接酶、高保真DNA聚合酶均购自Promage公司，质粒转染SuperFectinTMⅡ in Vrio DNA transfection Reagent试剂盒购自上海普飞生物技术有限公司，高纯度质粒小提试剂盒、Goat Anti-Mouse IgG DylightTM448及Hochest 33258购自康为世纪生物科技有限公司 ......