蒋梦亭，施锦梅，叶文蔚，潘 丹

    (台州学院附属市立医院 (台州市立医院) 妇科，浙江 台州 318000)

    宫颈癌是发生在子宫颈部位的恶性肿瘤，疾病晚期的患者预后较差，且发病机制尚不清楚，因此更好地了解肿瘤进展非常重要。microRNA是一组小的非编码RNA，通过结合目标基因互补序列的3’非翻译区负调节基因。研究表明，miRNAs在多种生物过程中如细胞增殖、分化、凋亡和肿瘤发展等过程中发挥着重要作用。miR-377是染色体14q32上的大miRNA簇的成员，在一些人类恶性肿瘤中低表达，包括室管膜瘤、骨肉瘤、胃肠间质瘤和胶质瘤，有文献报道miR-377通过靶向pim3抑制胰腺癌的增殖。另有研究发现，miR-377过表达可抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移，并促进其凋亡，其机制可能与下调HDAC9、ETS-1蛋白表达有关。但目前关于miR-377与宫颈癌之间的关系尚不明了。本研究拟探究miR-377在宫颈癌中的表达及其作用机制，为进一步深入了解其在宫颈癌中发挥的调控作用而奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 宫颈癌组织、距病变位置约为10 mm的癌旁正常组织，标本来自我院，采集的标本均获得患者或家属同意。人宫颈上皮永生化细胞株(H8细胞)、Hela、SiHa、Caski细胞购自上海奥陆生物科技有限公司；DMEM培养基购自中国赛默飞世尔科技公司；PKA通路抑制剂H-89购自美国Selleck公司；E-cadherin、N-cadherin抗体购自上海圣克鲁斯生物公司；CUL4A siRNA、miR-377 mimics、miR-377 inhibitor质粒由GenePharma公司合成。本实验经过本院伦理委员会审查和批准。

    1.2 细胞培养与转染 用DMEM培养基培养宫颈癌细胞Hela、SiHa和Caski细胞、H8细胞，培养基中添加10% FBS，置于37 ℃、5% CO培养箱中，长满后传代培养。Hela细胞长满后分散铺于12孔板，密度达70%时，添加DMEM培养基，按照说明书将Turbofect、质粒、Opti-MEM混匀后静置20 min，滴至细胞中，48 h后收集细胞样用于后续检测。转染的细胞分为五组：第一组，包括Control组、mimics NC组和miR-377 mimics组；第二组，包括Control组、inhibitor NC组和miR-377 inhibitor组；第三组，包括CUL4A wt+mimics NC组、CUL4A wt+miR-377mimics组、CUL4A mut+mimics NC组、CUL4A mut+miR-377mimics组；第四组 ......