骆锴冉，刘 岸

    (1.绍兴文理学院附属医院 普外科，浙江 绍兴 312000；2.湖南理工学院 化工学院，湖南 岳阳 414000)

    胰腺癌组织中的血管分布密度与胰腺癌的恶性生物学行为存在明显相关性，胰腺癌血供丰富[1]，已有诸多抗血管生成靶向药物如多靶点酪氨酸激酶抑制剂(索拉非尼)、VEGF/VEGFR单抗(阿西替尼)等应用于胰腺癌临床化疗，但胰腺癌患者对此类靶向药物多存在一定的毒性反应和耐药现象，使得胰腺癌患者的预后不理想[2]。抗糖尿病双胍类药物——苯乙双胍(phenformin)是一种高效的线粒体抑制剂[3]，在多种恶性肿瘤[4-5]中均表现出一定的抗癌活性，其抗肿瘤作用强于二甲双胍[6]。目前正在进行的一期临床试验(NCT03026517)旨在确定苯乙双胍联合小分子靶向药物(达拉非尼和曲美替尼)治疗黑色素瘤患者的最佳剂量，而苯乙双胍对恶性肿瘤血管生长的影响尚未探明。本研究观察苯乙双胍对体内外胰腺癌血管生成的抑制作用，并对其抗肿瘤的具体作用机制进行分析。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株和主要试剂 HUVECs、人胰腺正常导管上皮细胞系HPDE6-C7和胰腺癌细胞系PANC-1购于美国模式培养物保存中心(ATCC)，苯乙双胍购自江苏千胜医药科技有限公司，VEGFA和Drabkin 525试剂盒购自美国Sigma公司，DMEM高糖培养基和胎牛血清购自杭州四季青生物科技有限公司，含EDTA胰蛋白酶购自中国吉诺公司，Matrix胶购自美国BD公司，细胞计数-8(CCK-8)试剂盒购自上海Biyuntian 公司，VEGFA、phospho-VEGFR2、Total-VEGFR2、phospho-ERK、Total-ERK和β-actin抗体均购自美国Epitomics公司。

    1.2 细胞培养 所有细胞株均在含10%胎牛血清的DMEM培养液中和环境为37 ℃、5% CO2条件下进行培养 ......