范庆浩,鲍献荣,赵 涵

    (金华市人民医院 心胸外科,浙江 金华 321000)

    非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要类型,目前尚缺乏持续有效的治疗方案,从分子生物学层面挖掘新型治疗靶标,将有重要的临床意义[1]。长链非编码RNA(LncRNA)对肿瘤的发生发展有重要的调控作用[2-3]。研究[4]表明,LncRNA MRPL39可靶向miR-130抑制胃癌细胞的增殖。前期通过检索GEO数据库中NSCLC肺癌组织与正常肺组织的miRNA测序芯片数据(ID:200135918),发现miR-130在NSCLC中表达下降。Ye等[5]研究也显示,低表达miR-130与NSCLC患者不良预后密切相关。但miR-130在NSCLC中的上游调控机制尚未阐明。故本研究检测MRPL39和miR-130在NSCLC组织标本中的表达水平,并在细胞水平和动物水平验证MRPL39对miR-130及NSCLC的影响,拟探究MRPL39在NSCLC中是否可能靶向miR-130促进疾病的发生发展。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 纳入2021年6月—2021年12月于我院心胸外科首次确诊、需手术切除的NSCLC患者30例,术中留取癌组织和癌旁组织;患者术前未接受过其他抗肿瘤治疗。其中男13例,女17例;年龄41～72岁,平均(56.37±12.41)岁;病理类型:鳞癌18例,腺癌10例,其他2例;NSCLC分级:Ⅰ级3例,Ⅱ级8例,Ⅲ级13例,Ⅳ级6例。受试患者均知情同意,本研究经医院伦理委员会审批。

    1.2 细胞与动物来源 人肺腺癌细胞系A549购自美国ATCC细胞中心;20只BALB/c裸鼠购自南京大学模式动物研究所,4～5周龄,体质量18～22 g,动物许可证号:SCXK(苏)2021-0010,于特定无病原体条件下饲养。

    1.3 细胞培养与转染 以DMEM培养基(含10%胎牛血清)、37 ℃、5%CO2条件培养细胞,隔天更换培养基,待细胞生长至80%时进行传代培养,取对数生长期细胞分为空白组、sh-NC组、sh-MRPL39组、sh-MRPL39+anti-miR-NC组和sh-MRPL39+anti-miR-130组,根据脂质体2000(美国Invitrogen公司)说明书进行转染,空白组不做转染处理,sh-NC组、sh-MRPL39组、sh-MRPL39+anti-miR-NC组和sh-MRPL39+anti-miR-130组分别将杂序shRNA、sh-MRPL39、sh-MRPL39+无意义小分子阴性对照片段和sh-MRPL39+miR-130抑制剂(由上海吉凯公司合成)转入细胞,转染48 h后收集细胞用于后续实验 ......