李心芸,熊振飞,吴杏英,汤样华

    (1.杭州市萧山区第一人民医院 康复科,浙江 杭州311200;2.杭州市萧山区中医院 骨科,浙江 杭州311201;3.浙江中医药大学 第三临床医学院,浙江 杭州 310053)

    关节软骨纤维化、退行性变和丢失,关节边缘和软骨下骨骨质再生,以至关节不稳、半脱位和屈曲性挛缩是膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的主要发病机制[1],与正常磨损、年龄及肥胖等密切相关[2]。KOA的总发病率达到8.1%,其中,在60岁以上人群中高达30%[3]。目前临床治疗KOA尚无特效药,多用非甾体抗炎镇痛药、膝关节镜治疗及人工膝关节置换等,但常伴有各种副反应及并发症[4]。

    低频脉冲电磁场作为一种无创伤、费用低廉、可长期使用的非药物疗法,近年来成为骨关节炎物理治疗领域的研究热点。中医辨证分型分期研究发现[5],骨关节炎以肝肾亏虚、气血不足为本,局部血瘀为标。团队前期研究结果[6-7]显示,自拟益气化瘀补肾方对气虚血瘀型膝骨性关节炎具有较好的治疗效果。本研究选取基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、X型胶原蛋白(Col-X)作为观察指标,从分子生物学、形态学角度来探讨益气补肾化瘀方联合低频脉冲电磁场对小鼠膝关节软骨组织的影响。

    1 实验材料和方法

    1.1 实验动物 SPF级雄性C57BL/6小鼠45只(8周龄)由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供(动物生产许可证号SCXK(沪)2013-0016)。饲养条件:(22±2) ℃ 恒温,湿度50%～60%,光照每12 h明暗交替,换风次数15～20次/h。实验过程中对动物的处置符合中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》的要求。本研究通过杭州市萧山区第一人民医院医学伦理委员会审核。

    1.2 主要试剂和仪器 本研究中所用主要试剂包括Trizol、RIPA裂解液、PMSF、Citrate 柠檬酸盐缓冲液(MDL)、苏木素染液、DAB kit、MMP13 抗体、beta Catenin Antibody、小鼠TNF-α ELISA试剂盒、番红固绿染色试剂盒、小鼠IL-1β ELISA试剂盒、SYBR Green qPCR试剂盒、HiFi-Script cDNA第一链合成试剂盒等,主要仪器有低频脉冲电磁场治疗仪(龙之杰,型号LGT-20000A)、Micro-CT(ZKKS,型号MCT-Ⅲ)、酶标仪(MD,型号CMaxPlus)、核酸定量仪(Thermo Scientific,型号Nanodrop one)、实时荧光定量PCR仪(罗氏,型号LightCycler? 96)、正置荧光显微镜(Leica,型号DM3000)、成像系统(日本尼康,型号Nikon DS-U3) ......