刘守磊,陈善苗,李耀军,罗 晓,卢红荪,王诗建,沃奇军,祁小龙

    (1.桐乡市第一人民医院 泌尿外科,浙江 桐乡 314500;2.浙江省人民医院 泌尿外科,浙江 杭州 310014)

    前列腺癌是一类严重危害男性健康的泌尿系统恶性肿瘤,近年来在我国的发病率呈持续增长趋势[1]。尽管得益于诊断水平的提高及手术治疗、抗雄激素治疗和免疫治疗等手段的综合运用,患者的整体生存状况已经有了一定的改善,但部分患者仍因发生转移导致死亡[2]。CT45家族是癌睾抗原(cancer/testis antigens,TAs)中的成员之一,由六个高度保守的基因组成,命名为CT45A1到CT45A6[3-4]。CT45A1在多种类型的恶性肿瘤中呈现异常高表达,并通过多种作用机制发挥着促肿瘤效应[5-7],但CT45A1在前列腺癌细胞中的表达情况及其发挥的作用尚不明确。本研究分析CT45A1在前列腺癌细胞中的表达情况及对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并从上皮-间质转化角度探索分子作用机制,希望为靶向CT45A1控制前列腺癌提供实验性支持。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养 高侵袭力人前列腺癌PC-3细胞、低侵袭力人前列腺癌LNCap细胞以及小鼠肺成纤维NIH-3T3细胞,均购自中科院上海生命科学研究院细胞资源中心。LNCap和PC-3细胞培养于含10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基,NIH-3T3细胞置于10% FBS的DMEM培养液中培养;所有细胞均放置于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养。

    1.2 主要试剂 磷酸钙转染试剂来自Promega公司,荧光定量PCR试剂盒和逆转录试剂盒购自Thermofisher公司,定量PCR引物和shRNA寡核苷酸委托上海生工公司合成。慢病毒包装载体以及shRNA慢病毒表达载体pLKO.1-puro购自Addgene公司。用于迁移实验的Transwell小室购自Corning公司,用于侵袭实验的包被基质胶的BD BioCoatTMBD MatrigelTMInvasion Chamber购自BD Biosciences公司。兔抗人CT45A1抗体购自ORIGENE公司,兔抗人β-actin、E-cadherin、Vimentin、Twist、Zeb-1抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG(二抗)购自Proteintech公司 ......