对PCR-荧光探针检测207例大三阳标本假阴性率的分析

http://www.100md.com 2011年6月15日 《中外医学研究》 201117

     【摘要】目的对ELISA所测乙肝大三阳标本进行PCR定量检测时所出现的假阴性结果进行分析。方法207例ELISA检测为大三阳的标本，同时用PCR-荧光探针扩增，测定其病毒数量。结果207例标本中有14例PCR扩增后为阴性。结论PCR-荧光探针对大三阳标本的阳性率不能达到100%，在检测乙肝病毒的是否复制时，应对乙肝五项指标和PCR扩增实验结果综合分析。

    【关键词】ELISA；PCR-荧光探针；乙肝大三阳

    ELISA检测乙肝五项指标(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)和PCR-荧光探针HBV-DNA定量检测为临床常用检测项目，二者在确诊乙肝患者及确定此患者是否具有传染性上有重要意义。乙肝大三阳患者血液内存在乙肝Dane颗粒，这时病毒处于复制状态，如进行PCR-DNA荧光探针检测病毒数量，此时DNA定量检测应为阳性结果。但实际工作中，对207例大三阳标本进行PCR扩增，出现了14例阴性结果，本文探讨分析了出现假阴性结果的原因，并结合临床说明假阴性结果所提示的临床意义。

    1资料与方法

    1.1试剂与仪器乙肝五项ELISA试剂为上海荣盛生物药业有限公司生产；PCR试剂购自广东中山达安基因中心，检测灵敏度为1000 copy/ml；基因扩增仪为浙江杭州博日科技有限公司生产；微量荧光检测仪为广东珠海黑马医学仪器有限公司生产。

    1.2标本来源2009~2010年来笔者所在医院就诊，ELISA检验为乙肝大三阳的患者207人，留取血清标本(标本无溶血、脂血现象)进行PCR荧光定量实验。

    1.3检测ELISA检测及PCR荧光定量检测均按说明书严格进行。

    2结果

    207例ELISA检测为大三阳的标本，进行PCR定量检测，其中有14例出现假阴性结果，病毒数量<1000 copy/ml。实验中阴性对照品的 Ax称为N，临界阳性对照品的Ax称为P1，强阳性对照品的Ax称为P2，此三项结果满足P2>P1>N，证明实验有效。14例假阴性结果占总例数的6.7%，这与理论上PCR扩增大三阳标本100%阳性率有一定差距。

    3讨论

    国内大部分专家把HBeAg抗原的存在，作为病毒复制的标志，大部分相关文献显示当HBeAg存在时，PCR扩增为阳性。在本研究分析中，PCR荧光技术闭管检测，结果有较高的特异性和敏感性。207例大三阳标本中出现14例假阴性结果，经查有关资料并与临床医生沟通，分析原因如下：(1)患者服用抗病毒药物，药物抑制病毒数量，未达到检测标准，PCR为阴性。(2)PCR只能检测游离的HBV-DNA[1]，当病毒整合到肝细胞染色体上表达时,血清中无乙肝病毒颗粒时，ELISA阳性，PCR阴性。(3)患者感染的HBV病毒发生变异，这时PCR为阴性结果，所以乙肝患者进行PCR检测的结果，应与ELISA乙肝五项指标进行综合分析。当PCR扩增为阴性时，认真进行ELISA监测，并及时与临床医生和患者沟通，分析原因，以免出现误诊，贻误治疗。

    参考文献

    [1]中华预防医学会肝病防治组.乙肝五项指标与荧光定量PCR•HBV•DNA检测相关性的分析.2007.

    【收稿日期】2011-04-26

    (本文编辑:刘曾敏), http://www.100md.com(郭唯 程连赛)

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