LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的对比探究
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【摘要】 目的:研究LAMP法和PCR法在阪崎肠杆菌快速检测中的差异,指导临床在阪崎肠杆菌快速检测中方法的选择。方法:针对阪崎肠杆菌的OmpA基因,设计相关特异性引物,分别建立LAMP法和PCR法两种检测方法体系对其进行检测,并对两种检测方法的灵敏度进行记录比较;分别采用两种方法对45株阪崎肠杆菌近源菌进行检测,分析比较两种方法的特异性;最后采用两种方法对60份商场奶粉样品进行检测,将检测结果与FDA检测结果进行比较分析。结果:两种检测方法的灵敏度检测结果显示:LAMP法对阪崎肠杆菌快速检测的敏感度(101 cfu/ml)明显高于PCR法(102 cfu/ml),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);在对45株阪崎肠杆菌近源菌的检测中,显示LAMP法有5株阪崎肠杆菌出现阳性结果,而PCR法则显示非特异性条带,表明LAMP法检测的特异性明显优于PCR法。结论:LAMP法对阪崎肠杆菌快速检测有效可行、灵敏度高、特异性强,是临床进行阪崎肠杆菌快速检测的一种有效方法。
【关键词】 LAMP; PCR; 阪崎肠杆菌
中图分类号 R33 文献标识码 A 文章编号 1674-6805(2013)5-0001-02
阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,是奶粉(乳)制品中新发现的一种致病菌。由其可引发婴儿各种疾病,致病机制可能与其侵入、诱导凋亡及肠毒素作用有关[1]。对于阪崎肠杆菌的检测,最新研究发现LAMP法对阪崎肠杆菌快速检测,灵敏度高、特异性强[2]。笔者所在医院应用LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的进行对比探究,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 菌株标本
所研究的菌株共60株,其中2株阪崎肠杆菌标准菌株是由广东省微生物研究所提供的ATCC51329和ATCC29544,8株阪崎肠杆菌野生菌株是采用FDA传统手段从商场奶粉或果汁中提取出来的;其余在试验中用到的菌株均为本实验室自己保存。
1.2 仪器
细菌基因组DNA抽提试剂盒(上海生工生物工程技术服务有限公司),Bst DNA Polymerase(美国NEB公司),betaine(美国Sigma公司),agarose(Promega) ......
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